[发明专利]骨骼肌组织线粒体的提取方法

权利要求书

1.骨骼肌组织线粒体的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一：取肌肉组织，切成肉糜；

步骤二：将肉糜与裂解液混合并匀浆，得匀浆液；其中，肉糜与裂解液的质量体积比为1.5~2 g:5 ml；

步骤三：将匀浆液置于温度为2~4℃、离心力为1300~1500g条件下离心5~8 min，得第一上清液，将第一上清液过滤，得第一滤液，将第一滤液置于温度为2~4℃、离心力为1300~1500g条件下离心5~8 min，得第二上清液，将第二上清液置于温度为2~4℃、离心力为15000~16000g条件下离心15~20 min，得第一沉淀；

步骤四：向步骤三制得的第一沉淀中加入洗涤缓冲液，混匀，置于温度为2~4℃、离心力为1300~1500g条件下离心5~8 min，得第三上清液，再将第三上清液置于温度为2~4℃、离心力为15000~16000g条件下离心15~20 min，得第二沉淀，即得骨骼肌组织线粒体，其中，洗涤缓冲液与第一沉淀的体积质量比为0.1ml/100μg；

步骤二中裂解液配方为：150 mmol/L氯化钠，pH为7.4的10 mmol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液，225 mmol/L甘露醇，75mmol/L蔗糖，1%聚乙二醇辛基苯基醚，0.5%脱氧胆酸钠，1 mmol/L乙二胺四乙酸，1 mmol/L乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸，1片/50 ml蛋白酶抑制剂；

步骤一中肌肉组织为骨骼肌组织；

步骤四中洗涤缓冲液配方为：0.25 mol/L蔗糖，pH为7.4的0.003 mol/L 乙二醇双（2-氨基乙基醚）四乙酸-三羟甲基氨基甲烷，pH为7.4的0.01mol/L三羟甲基氨基甲烷-盐酸溶液；

步骤二中的匀浆器进行改进：匀浆杵的研磨部位和匀浆器主体内壁形状均为倒三角形或均为半圆形结构，所述匀浆杵的研磨部位和所述匀浆器主体内壁相配合，匀浆器主体内壁和匀浆杵研磨部位外表面均为磨砂材料。

2.如权利要求1所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，其特征在于，步骤一中骨骼肌在离体12 h内降至0~4℃。

3.如权利要求1所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，其特征在于，步骤一中骨骼肌为温度为0~4℃、离体24 h内的样本。

4.如权利要求1所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，其特征在于，步骤一中切成的肉糜小于2 mm³。

5.如权利要求1所述的骨骼肌组织线粒体的提取方法，其特征在于，步骤三中将第一上清液过滤时，纱布的层数不小于8。