[发明专利]一种多功能融合酶和多功能融合酶真核表达载体及其构建方法有效
| 申请号： | 201911170441.5 | 申请日： | 2019-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN110846297B | 公开（公告）日： | 2023-04-07 |
| 发明（设计）人： | 张献伟;莫健新;王豪强;李国玲;阮晓芳;钟翠丽;黄广燕;蔡更元;吴珍芳 | 申请（专利权）人： | 温氏食品集团股份有限公司;华南农业大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C12N9/16;C12N9/18;C12N9/88;C12N9/42;C12N15/85 |
| 代理公司： | 北京中普鸿儒知识产权代理有限公司 11822 | 代理人： | 曲芳兵 |
| 地址： | 527300 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 多功能 融合 酶真核 表达 载体 及其 构建 方法 | ||
1.一种多功能融合酶XAPT，其特征在于，所述的多功能融合酶XAPT可以表达木聚糖酶、植酸酶、果胶酶、葡聚糖酶和纤维素酶活性，所述的多功能融合酶XAPT基因由木聚糖酶基因-A3-植酸酶基因-furin-P2A-果胶酶基因-A3'-纤维素酶基因组成，所述的A3的基因序列如SEQ ID No:5所示，所述的A3'基因序列如SEQ ID No:6所示，所述的多功能融合酶XAPT基因序列如SEQ ID No:11所示。
2.根据权利要求1所述的多功能融合酶XAPT，其特征在于，所述的多功能融合酶XAPT具有如SEQ ID No:12所示的氨基酸序列。
3.一种多功能融合酶XAPT真核表达载体，其特征在于，所述的真核表达载体可以表达如权利要求1或2所述的多功能融合酶XAPT。
4.根据权利要求3所述的多功能融合酶XAPT真核表达载体，其特征在于，所述的真核表达载体的基因序列如SEQ ID No:13所示。
5.根据权利要求4所述的多功能融合酶XAPT真核表达载体，其特征在于，所述的真核表达载体的构建方法，包括如下步骤：
候选目的基因的筛选和优化；
连接肽的设计；
目的基因与连接肽连接；
多功能融合酶基因XAPT的合成；
构建CEP112位点定点转XAPT基因表达载体：将XAPT多顺反子替换CEP112-LA340RA3219载体中BEXA顺反子，构建新载体Cep112-mPSP-XAPT；用PacI和sexAI线性化Cep112-mPSP-XAPT，然后用inf-npsp引物扩增npsp上游调控区，并替换现有mpsp序列；构建CEP112位点定点转XAPT基因表达载体Cep112-npsp-XAPT。
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