[发明专利]用于欧鳇和闪光鲟物种鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用

说明书

本发明涉及一种用于欧鳇和闪光鲟物种鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用，其包括正向引物P3‑89F和反向引物P3‑89R，其中正向引物P3‑89F具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，反向引物P3‑89R具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。本发明可以实现欧鳇和闪光鲟间的快速种间鉴定，且鉴定结果准确。

技术领域

本发明属于水产动物种质鉴定领域，具体涉及用于欧鳇和闪光鲟种间鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用。

背景技术

鲟鱼，即鲟形目鱼类(Acipenseriformes)，是古老的软骨硬磷鱼类，起源于白垩纪时期，迄今已有2亿年的历史，素有“水中活化石”之称。其骨可成胶、肉质细腻、味道鲜美，营养价值高，尤其是鲟鱼子酱富含优质蛋白质、氨基酸和微量元素，被誉为“黑色黄金”，与鹅肝、松露并称为世界三大美食。随着鲟鱼养殖业的快速发展，我国已经成为世界鲟鱼养殖第一大国。目前生产鱼子酱的养殖品种主要以杂交鲟和外来鲟为主，其中外来鲟欧鳇(Husohuso)和闪光鲟(Acipenser stellatus)生产的鱼子酱价值最高，在我国人工养殖的比重逐年增加，进一步的，随着鱼子酱进出口贸易的法制化，鱼子酱品种鉴定越来越收到重视。

此外，欧鳇和闪光鲟等外来鲟的大范围养殖中可能会出现，导致其与我国特有的中华鲟、长江鲟、施氏鲟等进行杂交繁殖，造成遗传污染。

综上所述，对欧鳇和闪光鲟等进行快速、准确的物种鉴定具有重要的意义。但由于欧鳇和闪光鲟属于多倍体鲟鱼，遗传鉴定较二倍体鱼类更为复杂，截止目前，有关欧鳇和闪光鲟种质、种间和相关的副产品等的简便、快速和有效的鉴定方法尚未建立。

发明内容

本发明针对上述现有技术中的缺陷，提供了一种用于欧鳇和闪光鲟种间鉴定的SSR引物对组、试剂盒、鉴定方法及应用，其可以实现欧鳇和闪光鲟间的快速种间鉴定，且鉴定结果准确。

本发明为解决上述技术问题所提供的技术方案如下：

一方面，提供了一种用于欧鳇和闪光鲟物种鉴定的SSR引物对组，其包括正向引物P3-89F和反向引物P3-89R，其中正向引物P3-89F具有如SEQ ID NO.1所示核苷酸序列，反向引物P3-89R具有如SEQ ID NO.2所示核苷酸序列。

优选的，所述正向引物P3-89F可用荧光染料进行标记。

一方面，提供了一种用于欧鳇和闪光鲟物种鉴定的试剂盒，其包括上述SSR引物对组。

优选的，所述试剂盒还包括：水、PCR缓冲液、dNTPs、DNA聚合酶、上样缓冲液中的一种或多种。

一方面，提供了一种欧鳇和闪光鲟间的物种鉴定方法，其包括如下步骤：

S1、提取待鉴定的欧鳇和闪光鲟的DNA样本；

S2、合成上述SSR引物对组，且利用所述SSR引物对组、以步骤S1中获取的DNA样本为模板进行PCR扩增；

S3、对经步骤S2获得的PCR扩增产物进行检测，以获得PCR扩增产物多态性原始数据；

以及S4、对PCR扩增产物多态性原始数据进行分析，以得出测序峰图数据，并根据所述测序峰图数据对欧鳇和闪光鲟进行鉴定。

优选的，在进行PCR扩增时，所述正向引物P3-89F的退火温度为50～60℃；所述反向引物P3-89R的退火温度为50～58℃。

优选的，在进行PCR扩增时，所述正向引物P3-89F与反向引物P3-89R的退火温度均为52℃。

另一方面，还提供一种上述SSR引物对组和/或上述试剂盒和/或上述鉴定方法在欧鳇和闪光鲟的种间鉴定/种质鉴定/家系管理中应用。