[发明专利]一种生物移除四环素类抗生素的方法

说明书

本发明公开了一种生物移除四环素类抗生素的方法，包括如下步骤：(1)种子培养：培养克劳氏芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌二级种子；(2)移除：将含有四环素类抗生素的水体与发酵培养基混合配成降解液，将克劳氏芽孢杆菌二级种子和HM‑618二级种子接入降解液中，发酵。本发明建立了克劳氏芽孢杆菌与解淀粉芽孢杆菌的共培养体系，加入到含有四环素类抗生素的水体中，使解淀粉芽孢杆菌原位生产表面活性物质促进四环素类抗生素的生物移除，省去了表面活性剂的分离纯化等一系列繁琐的步骤；本发明不仅提高了四环素类抗生素的生物移除效率，还显著降低了四环素类抗生素转化产物的生物毒性。

技术领域

本发明属于环境修复领域，涉及一种表面活性剂辅助生物移除四环素类抗生素的方法。

背景技术

以氧四环素(OTC)和氯四环素(CTC)为代表的四环素类抗生素是一类广谱抗生素，广泛应用于畜牧业和水产养殖业，其使用量占总抗生素使用量的14％，在我国不同类型的水体环境中均检测到四环素类抗生素的存在。它不仅导致严重的水污染，威胁水生植物、动物以及微生物的生存，还会导致细菌中四环素耐药性的出现以及抗性基因的传播，因此寻求有效的方法移除水体中四环素类抗生素已迫在眉睫。

传统的物理方法例如吸附、光催化等成本较高且易造成二次污染。许多文献报道生物降解是移除四环素类抗生素的最主要途径，但目前对四环素类抗生素的生物移除多依赖环境中微生物群落，或集中在真菌物种上的纯菌培养，也有少量分离鉴定的具有四环素类抗生素降解能力的菌株，但其生物移除效率并不高，且其生物移除机制仍不是很清楚。

表面活性剂是一类即使在很低浓度时也能显著降低表(界)面张力的物质，目前已广泛应用于农业，食品生产，化学化工，医疗制药等行业，特别是石油工业和环境工程等一些特殊领域，其能通过乳化作用、提高假相溶解度以及增强降解微生物膜的通透性，促进运输等过程来提高有机污染物的生物可利用性。

目前，尚未有采用克劳氏芽孢杆菌和能产生表面活性剂的菌混合发酵生物移除四环素类抗生素的报道。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种生物移除四环素类抗生素的方法。

本发明的技术方案概述如下：

一种生物移除四环素类抗生素的方法，包括如下步骤：

(1)种子培养：将克劳氏芽孢杆菌Bacillus clausii T培养，得到克劳氏芽孢杆菌一级种子；将克劳氏芽孢杆菌一级种子培养，得到克劳氏芽孢杆菌二级种子；

将简写为HM-618的解淀粉芽孢杆菌Bacillus amyloliquefaciens HM-618，CGMCC7097培养，得到HM-618一级种子；将HM-618一级种子培养，得到HM-618二级种子；

(2)移除：按比例，将含四环素类抗生素的水体70-80mL加入到20-30mL发酵培养基中配成降解液；将步骤(1)获得的克劳氏芽孢杆菌二级种子和HM-618二级种子接入100mL降解液中，使总初始OD₆₀₀为0.15～0.23，克劳氏芽孢杆菌二级种子和HM-618二级种子的初始接种比例为1:1；在转速为200～220rpm，温度为36～38℃条件下发酵96-120h。