[发明专利]一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法

权利要求书

1.一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：按照下述步骤进行：

步骤1，分离生物气溶胶样品中胞内DNA

向生物气溶胶样品中加入NaH₂PO₄水溶液与聚乙烯基吡咯烷酮(PVPP)，20-30℃下震荡摇匀、离心后，得到沉淀物①和上清液①，上清液①滤膜真空过滤后，将滤膜重悬于NaH₂PO₄水溶液中，得到重悬液①，重悬液①离心后，得到沉淀物②；

步骤2，提取纯化生物气溶胶样品中胞内DNA

将步骤1得到的沉淀物①和沉淀物②合并后，重悬在DNA提取缓冲液中，上述缓冲液采用玻璃珠研磨法，得到重悬液②，向上述重悬液②中加入SDS缓冲液混合均匀后，得到混合液①，将混合液①采用冻融法破胞释放胞内DNA，得到上清液②和沉淀物③，将沉淀物③重悬于DNA提取缓冲液中，得到重悬液③，将重悬液③水浴加热至35-40℃后，加入SDS缓冲液混合均匀，得到混合液②，水浴加热混合液②至55-65℃，离心，得到上清液③，将上清液②和上清液③合并后，使用商用试剂盒纯化DNA，即得到生物气溶胶样品的胞内DNA。

2.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，DNA提取缓冲液的组成为100mM Tris-HCl、100mM Na₂-EDTA、100mM Na₃PO₄、1％CTAB、0.05mg/ml蛋白酶K和1.5M NaCl，DNA提取缓冲液的体积为2-4ml。

3.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，SDS缓冲液的浓度为10％，SDS缓冲液的用量为1-4ml。

4.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，玻璃珠研磨法使用的玻璃珠的直径为1mm，玻璃珠的用量为0.5-1.0g。

5.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，冻融法是将混合液①在液氮和水浴中置换多次，离心，其中，液氮放置时间为1-2min，水浴温度为55-65℃，水浴时间为18-22min。

6.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，重悬液③的水浴温度为35-37℃，水浴时间为1-3h。

7.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，混合液②水浴温度为55-60℃，水浴时间为18-22min。

8.根据权利要求1所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法，其特征在于：在步骤2中，得到生物气溶胶样品的胞内DNA的OD260/OD280为1.5-2.0。

9.如权利要求1-8任一所述的一种生物气溶胶中胞内DNA的提取方法在提取生物气溶胶的胞内DNA上的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：提取得到的生物气溶胶样品的胞内DNA的OD260/OD280为1.5-2.0。