[发明专利]利用HPLC-MS测定甲磺司特在血浆中含量的方法

说明书

本发明公开了利用HPLC‑MS测定甲磺司特在血浆中含量的方法。本发明的方法利用含特定的抗凝剂、酸、低温条件下前处理及正相色谱系统，为甲磺司特以药动学为终点的生物等效性评价提供了稳定、准确的定量方法，为该药的一致性评价提供有力支持。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体地，涉及一种利用HPLC-MS（高效液相色谱-串联质谱技术）测定甲磺司特在血浆中含量的方法。

背景技术

哮喘是一类严重危害人类健康的全球性疾病，其患病人群基数大、各个年龄阶段的人越来越多的受到该慢性疾病的困扰。根据WHO 2016年12月发布的估计，2015年全世界约有38.3万人死于哮喘，其中80%以上发生在低收入和中下收入国家。儿童是哮喘的易感人群，对于身体正处于发育阶段的儿童，哮喘患病率有较明显的上升趋势。我国儿童哮喘的患病率正以每10年翻一番的速度持续上升。目前用于治疗哮喘的药物主要有糖皮质激素、β2-受体激动剂、白三烯受体阻断剂、茶碱类和抗胆碱药五大类。根据哮喘患者病情的紧急轻重程度选用不同的药物，中重度及危重度患者需要联合用药。行业报告显示2020年哮喘类药物整体市场将维持在260亿美金左右。

甲磺司特是1995年日本大鹏药品工业株式会社研制的新型抗过敏药，通过抑制T细胞诱导的白细胞介素-4（IL-4）和白细胞介素-5（IL-5）的产生，从而抑制酸性粒细胞的侵润和抑制IgE抗体产生等作用，发挥抗过敏作用。主要用于治疗儿童及成人的支气管哮喘。根据临床表现，甲磺司特可完全或部分替代激素类药物，不仅具有较好疗效、而且具有长期用药安全、方便的特点。

建立准确的测定血浆样品中甲磺司特含量的生物分析方法是该药进行以药动学参数为终点的生物等效性评价的必要条件。目前未查到文献或专利报道其以药动学参数为终点的生物等效性测定方法。

发明内容

甲磺司特，CAS：94055-76-2，化学名：（RS）-(2-(4-(3-乙氧基-2-羟基丙氧基)苯基氨基甲酰)乙基)二甲基锍对甲苯磺酸盐，本发明利用含特定的抗凝剂、酸、低温条件下前处理及正相色谱系统成功地解决了该化合物在在血浆中不稳定、色谱系统上易分峰拖尾、易残留的技术难题。

本发明提供了一种利用HPLC-MS（高效液相色谱-串联质谱技术）测定甲磺司特在血浆中含量的方法，所述的测定方法包括如下步骤：

1）在低温条件下用含抗凝剂的采血管采集全血，并离心分离血浆；

2）样品管中加入酸，将步骤1）血浆转移至该样品管；

3）将步骤2）中采集的样品进行前处理后进行稀释，选择以硅羟基为固定相的色谱柱，以有机相与缓冲液的混合溶剂作为流动相梯度洗脱，以甲磺司特的同位素标记物作为内标进行HPLC-MS（高效液相色谱-串联质谱技术）分析。

在本发明的实施方案中，所述测定方法步骤1）所述的低温条件指冰水混合物、冰上、或0-10℃低温箱。

在本发明的实施方案中，所述测定方法步骤1）所述的抗凝剂是氟化钠-柠檬酸盐-乙二胺四乙酸钠盐、氟化钠-肝素钠、氟化钠-草酸盐、氟化钠-柠檬酸盐、氟化钠-乙二胺四乙酸钾盐、或氟化钠-乙二胺四乙酸钠盐。

在本发明的实施方案中，所述测定方法步骤2）所述酸的加入量为血浆体积比的0.1-2%。

在本发明的实施方案中，所述测定方法步骤2）所述的酸是甲酸、三氟乙酸、或乙酸。

在本发明的实施方案中，所述测定方法步骤3）所述的前处理为蛋白沉淀法，可选用有机溶剂沉淀法，所述的有机溶剂可采用乙腈、或甲醇。