[发明专利]口服余甘子鞣质部位后粪便中指标成分含量测定及28种成分分离鉴定方法

说明书

本发明提供一种口服余甘子鞣质部位后粪便中化学物质的检测方法，包括：HPLC法测定大鼠粪便中GA、corilagin和EA含量测定和分离鉴定口服余甘子鞣质部位后粪便中化学成分的HPLC‑MS方法。可同时分离鉴定出粪便中12种原型成分和16种代谢产物。具有简单快速、灵敏度高、准确性高、重现性好、分离鉴定数量高等优点，为余甘子鞣质部位粪便途径代谢和排泄研究提供一种可靠地分析方法。

技术领域

本发明涉及一种余甘子鞣质部位口服后粪便中化学成分UPLC-MSⁿ分析检测方法。

背景技术

药物经体内吸收后，进行水解、氧化、还原的一相代谢反应和与体内葡萄糖醛酸、硫酸等物质结合的二相代谢反应。通过代谢物分析可以确定药物在体内的显效形式。药物的排泄有肾排泄、胆汁排泄、粪便排泄、乳汁和汗液排泄等途径。药物葡萄糖醛酸或硫酸酯结合物经过十二指肠时在肠内菌群作用下水解成苷元，重新吸收入血，未被重吸收的成分则经粪便排出。研究药物的排泄和代谢对阐明药物的体内过程和变化，设计给药途径、给药剂量等具有重要的意义。

藏药余甘子为大戟科叶下珠属植物余甘子Phyllanthus emblica L. 的干燥成熟果实，鞣质含量很高，具有广泛的药理学活性，引起国内外研究者的高度重视，然而截止目前，尚未发现研究口服余甘子鞣质部位后在粪便中代谢、排泄的相关报道。此外，由于代谢产物的量很少，分离鉴定代谢产物尤其同时分离鉴定多种代谢产物是具有困难的工作。因此，需要一种能够有效评价余甘子鞣质部位粪便代谢和排泄情况的可行性分析检测方法。

发明内容

发明目的：本发明提供一种口服余甘子鞣质部位后粪便中化学物质的检测方法，包括：粪便样品预处理；指标性成分没食子酸、柯里拉京、鞣花酸在粪便中的含量测定方法；和可同时分离鉴定出粪便中12种原型成分和16种代谢产物的方法。具有简单快速、灵敏度高、准确性高、重现性好、分离鉴定数量多效果好等优点，是一种能够有效评价余甘子鞣质部位粪便代谢和排泄情况的分析检测方法。

技术方案：

本发明提供了一种口服余甘子鞣质部位后粪便中化学成分的检测方法，包括：

（1）采集粪便，冷冻备用；

（2）粪便样品预处理，包括：

取粪便样品，加入有机溶剂，研磨超声提取，离心；精密量取适量上清液，加入有机溶剂水溶液稀释；精密吸取稀释后上清液，加入内标溶液，充分混合，加入有机溶剂水溶液涡旋混匀，进高效液相色谱仪前微孔滤膜过滤，记录色谱图；

空白粪便按同样方法处理；

（3）指标性成分没食子酸（GA）、柯里拉京（corilagin）、鞣花酸（EA）在粪便中的含量检测，包括：

按步骤（2）“粪便样品预处理”方法操作，每个分析批制备一条随行标准曲线，根据随行标准曲线，计算大鼠粪便样品中GA、corilagin、EA浓度，用浓度乘以基质粪便体积后计算得大鼠粪便中GA、corilagin、EA的排泄量；

色谱条件：色谱柱为C18色谱柱；和/或柱温 28-32℃；和/或流速：0.8-1.2 ml·min^-1；和/或检测波长：268-272nm；和/或流动相：甲醇 - 0.2 % 冰醋酸/水梯度洗脱：0-20min 5-17%甲醇，20-25min 17-17%甲醇，25-28min 17-26%甲醇，28-42min 26-26%甲醇，42-57min26-60%甲醇，57-67min 60-90%甲醇； 67-72min 90-5%甲醇；

（4）HPLC-MS同时分离鉴定粪便中原型成分和代谢产物的方法：

粪便样品采集，同步骤（1）；

粪便样品预处理：同步骤（2）；