[发明专利]一种大规模高密度悬浮培养293细胞高产腺病毒的方法有效
| 申请号： | 201911158188.1 | 申请日： | 2019-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN110894494B | 公开（公告）日： | 2022-09-27 |
| 发明（设计）人： | 潘钊林;赖树生;黄运琦;徐翔宇 | 申请（专利权）人： | 广西梧州制药（集团）股份有限公司 |
| 主分类号： | C12N7/00 | 分类号： | C12N7/00;C12N5/073;C12N5/02;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南宁曙华知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 45121 | 代理人： | 李林生 |
| 地址： | 543000 广西壮*** | 国省代码： | 广西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大规模 高密度 悬浮 培养 293 细胞 高产 病毒 方法 | ||
1.一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，先进行无血清293SFM培养，开始进行病毒感染时更换成CD培养基培养，所述无血清293SFM培养的条件为：培养温度在36～38℃，pH7.0～7.4，溶氧浓度为30％～50％，培养时间为72～120h；所述CD培养基培养的条件为：培养温度为34～36℃，pH7.0～7.4，溶氧浓度30％～50％，感染48～96h收获病毒。
2.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述无血清293SFM培养的第45～52h开始进行灌流增加新鲜无血清293SFM，同时用细胞截流器把排除液中的细胞截流在罐体内。
3.如权利要求2所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述灌流的培养速度为3～8L/d。
4.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述CD培养基培养8h～12h后，灌流5L～10LCD培养基，在收取病毒的前24h终止培养灌流。
5.如权利要求4所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述灌流的搅拌速度为100～140rpm。
6.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述无血清293SFM培养的搅拌速度为80～160rpm。
7.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述无血清293SFM培养在第1天搅拌速度为80～100rpm，自培养第2天开始在120～160rpm的范围内逐步提高搅拌速度持续培养直到感染病毒。
8.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述CD培养基培养的搅拌速度为100～140rpm。
9.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，所述无血清293SFM培养前，用无血清293SFM培养基悬浮培养，先在摇瓶中培养再转移到罐内培养。
10.如权利要求1所述的一种大规模高密度悬浮培养293细胞腺病毒的方法，其特征在于，无血清293SFM培养前，取贴293壁细胞通过无血清293SFM+血清梯度递降培养方式驯化最终成无血清悬浮细胞。
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