[发明专利]一种表达E2-crimson的重组伪狂犬病毒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种重组伪狂犬病毒载体，其特征在于，所述重组伪狂犬病毒载体包括E2-crimson基因；

所述E2-crimson基因的核酸序列如SEQ ID NO：1所示；

所述重组伪狂犬病毒载体的空载体为pBB5载体。

2.一种如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒载体的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

采用限制性内切酶NsiI-HF处理pCMV-GF-E2-crimson载体，同时采用限制性内切酶pstI-HF处理pBB5载体；

对两种酶切产物进行回收、连接，得到所述重组伪狂犬病毒载体pBB5-E2-crimson。

3.一种重组伪狂犬病毒，其特征在于，所述重组伪狂犬病毒包括如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒载体。

4.一种如权利要求3所述的重组伪狂犬病毒的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

(1)采用限制性内切酶SpeI将重组伪狂犬病毒载体pBB5-E2-crimson进行线性化处理；

(2)提取PRV152病毒基因组；

(3)将线性化pBB5-E2-crimson与PRV152病毒基因组共转染宿主细胞，得到所述重组伪狂犬病毒。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述提取PRV152病毒基因组的方法包括：

采用PRV152病毒感染宿主细胞，使PRV152病毒在宿主细胞中扩增；收集宿主细胞，进行细胞裂解；DNA提取得到所述PRV152病毒基因组；

步骤(3)所述宿主细胞包括293细胞、293T细胞或293F细胞中的任意一种或至少两种的组合。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，在步骤(3)之后还包括对重组伪狂犬病毒进行筛选和纯化的步骤。

7.一种神经网络示踪剂，其特征在于，所述神经网络示踪剂包括如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒载体和/或如权利要求3所述的重组伪狂犬病毒。

8.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒载体、如权利要求3所述的重组伪狂犬病毒或如权利要求7所述的神经网络示踪剂。

9.一种如权利要求1所述的重组伪狂犬病毒载体、如权利要求3所述的重组伪狂犬病毒、如权利要求7所述的神经网络示踪剂或如权利要求8所述的试剂盒在制备神经系统疾病检测试剂中的应用。