[发明专利]MAR序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法有效
| 申请号： | 201911154326.9 | 申请日： | 2019-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN110863008B | 公开（公告）日： | 2020-10-16 |
| 发明（设计）人： | 王斌;刘凌云;范志伟;殷旭东;王德斌;王定康 | 申请（专利权）人： | 昆明学院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/67;C12N15/65 |
| 代理公司： | 昆明祥和知识产权代理有限公司 53114 | 代理人： | 马汝兰 |
| 地址： | 650214 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | mar 序列 调控 启动子 构建 高效 表达 载体 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种MAR序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
（1）选择不含增强子且在转录起始位点含有CpG岛的启动子即人源SOX2基因启动子为靶启动子；
（2）用所述靶启动子替换商业载体pEGFP-C1上的外源基因表达框中的CMV启动子，构建中间载体；所述构建中间载体步骤中，用带AgeI和AseI双酶切位点引物扩增所述靶启动子序列，所述引物为：
SOX2＃正向引物：CCGTGATTAAT (Ase I)AGACAAGGAAGGTTTTGAGGAC
SOX2＃反向引物：ATATGACCGGT(Age I)ATCCGGGCTGTTTTTCTGGTT；
（3）在所述中间载体的外源基因表达框上游Ase I酶切位点插入MAR序列，构建表达载体，所述MAR序列如序列2所示；所述表达载体经验证能使EGFP基因表达量持续稳定高效表达。
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