[发明专利]测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法

权利要求书

1.测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质，杂质具体结构如下所示的方法：

1)使用高效液相色谱-质谱联用仪，并设置参数如下：

色谱柱：C18；检测器：紫外检测器VWD；进样盘不控温；进样体积20μl；测试时间：30～60min；柱温：30～40；℃波长：220-250nm；流速：0.2～1.0ml/min；流动相：由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为0.005～0.010mol/L乙酸铵缓冲盐溶液或0.05～0.1体积％的甲酸水溶液，流动相B为乙腈、或含0.05～0.1体积％甲酸的乙腈混合溶液，等度或梯度分离；采用二维色谱将高浓度的原料药切入废液，同时第二组泵向质谱泵入清洗流动相；

质谱质量分离器类型：四极杆；电离方式：电喷雾电离；毛细管电压：3000～3500V；干燥气流速：12L/min；雾化气压力45psig；碎裂电压：50～100V；

2)溶液配制方式

稀释溶剂：乙腈水溶液；

供试液：应用乙腈和稀释溶剂配制供试液，供试液的浓度为10mg/ml；

杂质对照液：应用乙腈和稀释溶剂配制杂质对照液，杂质对照液的浓度为0.05μg/ml；

供试品加标液：应用乙腈和稀释溶剂配制供试品加标液，所述供试品加标液中样品原料药的浓度为10mg/ml，杂质的浓度为0.05μg/ml；

线性溶液：范围从定量下限至200％限度浓度水平，应用乙腈和稀释溶剂分别配制在2～10mg/ml的样品溶液中；定量依据：面积或与内标的面积比；

3)计算公式：

C＝a×A+b

X＝C×S×1000/m

式中：X：供试品中待测物的含量，单位是ppm

A：供试品溶液色谱图中待测物与内标物的峰面积比

a：线性回归曲线斜率

b：线性回归曲线与Y轴截距

m：供试品的称样量，mg

S：供试品的稀释倍数

C：供试品溶液色谱图中待测物的浓度，单位是μg/ml。

2.如权利要求1所述的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，其中，步骤1)所述的色谱柱的固定性为十八烷基硅胶色谱柱，粒径为3～5μm，长度为150～250mm，内径为2.1～4.6mm。

3.如权利要求1所述的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，其中，所述杂质的安全限度均为5ppm；定量限要求至少为50％安全限度，即≦2.5ppm。

4.如权利要求1所述的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，其中，步骤1)所述的液相色谱条件，优选岛津Inert Sustain C18，2.1mm*150mm 3μm，测试时间：30min，柱温40℃；流速：0.300ml/min；流动相：流动相A为0.1体积％的甲酸水溶液，流动相B为含0.1体积％甲酸的乙腈混合溶液；梯度分离。

5.如权利要求1所述的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，其中，所述的质谱条件，优选单四极杆质谱，毛细管电压：3000V；碎裂电压：70V；干燥气流速：12L/min；雾化气压力45psig；碎裂电压：100V；在含0.1体积％甲酸的流动相体系下，A、B、C定量分子离子峰m/z优选276、379、481。

6.如权利要求1所述的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，其中，步骤1)所述的二维色谱技术包含只增加阀切换、两组或更多液相泵进行组合的色谱分离系统。

7.如权利要求1所述的测定甲磺司特原料药中3种基因毒性杂质的方法，其中，步骤1)所述杂质A、B和C的定量离子的加合形式包括H⁺、Na⁺、NH₄⁺、H^-、HCOO^-、CH₃COO^-。