[发明专利]基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法

说明书

本发明公开一种基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法。通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞吞噬荧光微球能力来评价药品/保健品增强免疫力的能力。本发明的方法灵敏性高、稳定性好，易于操作，本发明的流式细胞术‑荧光微球双标法数据获得快、且客观，重复性较好。

技术领域

本发明属于药品/保健品检测领域，具体的涉及一种基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法

背景技术

免疫力低下容易生病，因经常患病，加重了机体的消耗，所以一般出现体质虚弱、营养不良、精神萎靡、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍等表现。生病、打针、吃药、便成了家常便饭，每次生病都要很长时间才能恢复，而且常常反复发作。长此以往会导致身体和智力发育不良，还易诱发重大疾病。因此现有技术中出现相当多的具有增强免疫力的药品或保健品。还有个别非法分子打着增强免疫力的幌子，大肆宣传。因此需要对这些药品或保健品进行检测。在检测检验领域，有些方法因操作繁琐、主观影响因素大，令从事该领域的技术人员很头疼，所以亟需寻求一种更简便、更高效、更准确的检测方法。近年来，随着先进科学仪器的发明和普及应用，使检验检测领域方法更新有更多可能。采用流式细胞术-荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的方法还没见报道。

发明内容

为了解决以上问题，本发明提供一种检测结果准确，灵敏度高，差异性小，减少人为因素的基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法。

本发明采用的技术方案是：基于流式细胞术荧光微球双标法快速评价药品/保健品增强免疫力的新方法，方法如下：

1)样品制备：将待测药品/保健品溶于生理盐水中，制成待测样品溶液；将检疫合格的小鼠，随机分为供试品组和正常对照组，供试品组腹腔注射待测样品溶液；末次注射后，按摩各组小鼠腹部，分别吸取腹腔液；

2)制备荧光微球：将荧光微球用质量百分浓度为1％的BSA溶液稀释200-400倍，制备荧光微球BSA溶液，于37℃避光孵育30min后，超声5min；

3)将步骤2)超声后的荧光微球BSA溶液，均匀的分配到6孔板上，每个孔内加入300μl荧光微球BSA溶液，同时加入步骤1)获得的腹腔液1.7ml，上下左右平行移动六孔板，使液体充分混合，然后置于生化培养箱中37℃避光孵育2.5h；将培养后的6孔板取出，弃上清，沿6孔板壁轻轻加入4℃保存的生理盐水1ml洗涤，用生理盐水洗两遍后，加入500μl生理盐水，用细胞刮刮取细胞，用移液枪将含有细胞的生理盐水吸入2ml EP管中，6孔板内再次加入1000μl生理盐水，洗下残留的细胞，合并至刚刚的2ml EP管中，1500rpm/min离心5min，弃去上清，加入100μl生理盐水，并加入F480抗体3μl，混匀，室温避光20min加入1ml生理盐水，1500rpm/min离心5min，弃去上清，加入300μl生理盐水，混匀，经75μm过滤器过滤，取滤液；

4)将步骤3)获得的滤液上流式细胞仪检测，在荧光微球发射光的荧光通路检测巨噬细胞的荧光强度，每份样品中获取若干个巨噬细胞，数据显示于二维散点图和直方图中，测定未吞噬荧光微球的巨噬细胞和吞噬荧光微球的巨噬细胞的比例。

进一步的，上述的新方法，步骤1)具体为：样品制备：将待测药品/保健品溶于生理水中，制成待测样品溶液；将检疫合格的小鼠，随机分为供试品组和正常对照组，供试品组分别于第一天和第六天腹腔注射待测样品溶液0.2ml/只/次；末次注射后第四天取供试品组和正常对照组小鼠，依次麻醉和消毒后，将小鼠放入紫外灭菌后的超净台，暴露腹腔膜，通过腹腔壁注入3ml生理盐水，按摩小鼠腹部后，分别吸取腹腔液。

进一步的，上述的新方法，所述荧光微球是羧酸基修饰荧光微球。

进一步的，上述的新方法，步骤4)中，在荧光微球发射光的荧光通路检测巨噬细胞的荧光强度时，每份样品获取5000个巨噬细胞。