[发明专利]一种益气补血片中黄芪甲苷含量测定方法

说明书

本发明涉及一种益气补血片中黄芪甲苷含量测定方法。制备方法，步骤1对照品溶液的配制，步骤2含量测定供试品溶液的制备，步骤3色谱条件，步骤4测定。本发明建立的样品前处理方法简化操作步骤，采用高效液相色谱法，流动相为乙腈‑水，采用十八烷级硅胶色谱柱，蒸发光散射检测器。所述方法与现有技术相比，方法简单、准确、重现性和稳定性好，检测成本低，检测结果分析快速，可更有效地控制该药的黄芪甲苷含量。

技术领域

本发明涉及益气补血片质量标准检测方法，具体涉及一种益气补血片中黄芪甲苷的液相色谱分析方法。

背景技术

益气补血片处方是由黄芪、人参、当归、大枣、制何首乌、陈皮等组成，具有益气补血，健脾滋肾。用于原发性血小板减少性紫癜属气血两虚证候者，症见皮下散在出血点，或兼见齿衄、鼻衄、神疲乏力，头晕目眩，心悸气短，食少纳呆，面色苍白，舌淡，脉细无力等。黄芪具有补气升阳，固表止汗，生津养血。用于气虚乏力，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄等作用，黄芪中的主要成分黄芪甲苷能增强机体免疫力、提高机体的抗病能力。而黄芪为益气补血片的君药。因此，检测黄芪甲苷的含量能有效的控制益气补血片的质量。

益气补血片收载于《国家药品标准新药转正标准第四十二册》第36页，该标准的含量测定方法为取本品20片，除去糖衣，研细，称取约2g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿50ml，回流提取2小时，弃去氯仿液，残渣挥干溶剂，加甲醇60ml，回流提取至无色。提取液回收甲醇至干，残渣加水20ml，微热使溶解，以水饱和的正丁醇提取5次，每次30ml，合并正丁醇提取溶液，用氨试液提取3次，每次50ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水5ml，加热使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长12cm)，以水50ml洗脱，弃去水液，再用40％乙醇30ml洗脱，弃去40％乙醇洗脱液，继以70％乙醇洗脱60ml，收集洗脱液，蒸干，用甲醇溶解并转移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB)试验，精密吸取供试品溶液6μl，对照品溶液2μl与4μl，分别交叉点于同一高效硅胶G薄层板上，以氯仿-甲醇-水(13:6:2)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在100℃加热至斑点显色清晰，取出，在薄层板上覆盖同样大小的玻璃板，周围用胶布固定，照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录ⅥB薄层扫描法)进行扫描，波长：λs＝530nm，λR＝700nm，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。

由于中成药处方组成不同，化学成分复杂，导致测定方法不同，而黄芪甲苷分离测定均操作较复杂。而益气活血片质量标准中的测定过程操作繁琐，分离黄芪甲苷经过多次提取，过柱色谱，采用薄层展开，进行双薄层扫描测定。操作过程复杂，测定误差会加大，且双薄层扫描测定，稳定性及重现性差。

发明内容

本发明的目的是要提供一种益气补血片中黄芪甲苷含量测定方法，该方法简单、准确、重现性和稳定性好，检测成本低，检测结果分析快速。

本发明的技术方案：

(1)对照品溶液的配制

取5.30mg的黄芪甲苷对照品，精密称重，置10ml容量瓶中，加甲醇溶液，稀释至刻度，得对照品溶液，备用。

(2)含量测定供试品溶液制备

取本品20片，除去糖衣，研细，精密称取2.0094g，置索氏提取器中，加入甲醇100-150ml，加热回流提取3小时，提取液采用旋转蒸发仪旋干，残渣加水30ml，超声5分钟使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40ml，正丁醇液采用旋转蒸发仪旋干，残渣中精密加入甲醇10ml振摇使溶解，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

(3)色谱条件