[发明专利]一株安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD及其应用

说明书

一株安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD及其应用，属于食品安全免疫检测领域。本发明经筛选得到一株安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.18511。并将其用于食品中安乃近及其代谢物残留物的检测。此细胞株分泌的单克隆抗体，对安乃近四种主要代谢物具有较好的亲和力和检测灵敏度，（MAA：IC₅₀=8.1 ng/mL，AA：IC₅₀=8.8 ng/mL，FA：IC₅₀=0.9 ng/mL，AAA：IC₅₀=0.6 ng/mL），可实现对肉制品、奶制品等中安乃近代谢物残留量的检测，为食品中安乃近代谢物残留的免疫检测提供了原料，具有实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一株安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD及其应用，属于食品安全免疫检测领域。

背景技术

安乃近(dipyrone，简写为Dip)为临床常用的解热镇痛药之一，属于吡唑酮类解热镇痛药，自投入临床用于治疗以来已有百年的历史。安乃近在体内可迅速水解成活性产物4-甲氨基安替比林(4-methylaminoantipyrine，MAA)，再进入体循环；MAA在体内代谢为4-甲酰氨基安替比林(4-formylaminoantipyrine，FA)和4-氨基安替比林(4-aminoantipyrine，AA)；AA可以继续代谢为4-乙酰氨基安替比林(4-acetylaminoantipyrine，AAA)，具体机理如图1所示。

安乃近具有较强的解热和镇痛作用，目前在许多国家被广泛使用，但该药能导致粒细胞减少、再生障碍性贫血、严重的过敏和休克虚脱等严重反应。由于其毒副作用和尚不确切的药效作用机理，世界上一些发达国家已经对安乃近作出了停止或限制使用的规定，如美国、瑞典禁止该药物用于食源性动物中，日本的肯定列表亦将其列入一律标准，而欧盟对安乃近在牛奶中的限量要求为 50 µg/kg(以MAA含量计算)。

目前报道的用于安乃近或其类似物的测定方法有分光光度法、流动注射化学发光光度法、薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)等，然而，这些仪器分析法都需要复杂的前处理，耗时，耗力，不适合大量样品的快速检测。为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对安乃近的高效、快速的检测方法，而酶联免疫法（ELISA）前处理简单，成本低，可实现大量样品的快速检测，且检测时对样本的纯度要求不高。因此，建立高效的免疫学检测方法很有必要，而建立此方法的一个重要前提即需筛选出针对安乃近的高特异性单克隆单体。

发明内容

本发明的目的是提供一株安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD及其应用，并在此基础上建立ELISA方法。

本发明的技术方案，一株安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年10月14日，保藏编号CGMCC No.18511。

安乃近单克隆抗体，它由所述保藏编号为CGMCC No.18511的安乃近单克隆抗体杂交瘤细胞株CBD分泌产生。

安乃近单克隆抗体的应用，用于食品中安乃近及其代谢物残留物的检测。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是用于牛奶中安乃近代谢物残留物的分析检测。

在本发明的一种实施方式中，所述应用是制备ELISA竞争法检测安乃近代谢物的试剂或检测试剂盒。