[发明专利]一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一、将血浆处理后取上清液进样，经过超高效液相色谱将ADMA和SDMA与血浆基质分离，其中色谱条件如下：色谱柱为三键键合式烷基柱，色谱柱柱温为30～50℃，进样量为0.5～5μL，流速为0.1～1mL/min，流动相A为0.2mM甲酸铵和体积分数0.004％甲酸的水溶液，流动相B为乙腈；

步骤二、将超高效液相色谱分离的ADMA和SDMA再通过串联质谱进行检测，根据建立的校准曲线计算ADMA和SDMA的含量，其中质谱条件如下：喷雾电压2.5～3.5kV，去溶剂温度为80～140℃，雾化气温度为350～450℃，雾化气流速为700～900L/h，锥孔气流速为120～180L/h。

2.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述步骤一中血浆处理的具体过程为：将血浆和内标液B按照体积比为1：(50～80)加入离心管中，先涡旋10～30s、振荡8～10min后进行离心，离心速率为12000～18000r/min，离心时间为8～12min，离心后取上清液作为待测样。

3.根据权利要求2所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于：所述血浆和内标液B按照体积比为1：60，离心速率为15000r/min，离心时间为10min。

4.根据权利要求2或3所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述内标液B的制备过程为：取同位素内标品ADMA-d7加入体积分数为50％的甲醇水溶液中溶解，得到摩尔浓度为10mM的同位素内标溶液，再用体积分数为50％的甲醇水溶液将该同位素内标溶液稀释至摩尔浓度为40μM的内标液A，将内标液A和甲醇按照体积比为1：2000混合即得内标液B。

5.根据权利要求1所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述色谱条件如下：色谱柱为ACQUITY UPLC BEH Amide，2.1×100mm，1.7μm；色谱柱柱温为40℃；进样量为1μL；流速为0.4mL/min；流动相梯度洗脱参数如表1所示：

表格1

，

其中流动相A为0.2mM甲酸铵和体积分数0.004％甲酸的水溶液，流动相B为乙腈。

6.根据权利要求2所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述校准曲线的制作过程为：将含ADMA和SDMA各0.1mM的标准品储备液与空白血浆基质溶液按照体积比为1：19混合后作为第一个高值浓度点，其摩尔浓度为5μM；再将第一个高值浓度点的溶液与空白血浆基质溶液按照体积比为1：1混合后作为第二高值浓度点，其摩尔浓度为2.5μM；再将第二高值浓度点的溶液与空白血浆基质溶液逐级稀释得到其余六个校准点；再将8个浓度点的溶液分别与内标液B按照体积比为1：60加入离心管中，先涡旋10～30s、振荡8～10min后进行离心，再分别取上清液进样，通过串联质谱进行检测，以标准品与内标物的浓度比为X轴，标准品与内标物的峰面积比为Y轴，建立校准曲线，即可。

7.根据权利要求6所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述空白血浆基质溶液为50mg/mL牛血清白蛋白水溶液。

8.根据权利要求1或6所述的一种超高效液相色谱串联质谱检测血浆中ADMA和SDMA的方法，其特征在于，所述质谱条件如下：喷雾电压3.0kV；去溶剂温度为120℃；雾化气温度为400℃；雾化气流速为800L/h；锥孔气流速为150L/h。