[发明专利]一种基于叶酸受体主动靶向的金纳米探针及其制备方法

权利要求书

1.一种基于叶酸受体主动靶向的金纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：以球状银纳米颗粒为模板，利用抗坏血酸还原氯金酸制备金纳米颗粒；

S2：利用叶酸分子中的羧基和HS-PEG_5K-NH₂中氨基的EDC–NHS反应，将FA共价交联在HS-PEG_5K-NH₂尾端，制备巯基聚乙二醇交联的叶酸HS-PEG_5K-FA；

S3：将HS-PEG_5K-FA、HS-PEG_5K-OMe溶解后加入步骤S1中新鲜制备的金纳米颗粒水分散液，利用巯基与金原子共价连接形成Au-S键的作用，在金纳米颗粒的表面共价偶联不同比例的巯基聚乙二醇甲氧基HS-PEG_5K-OMe和巯基聚乙二醇叶酸HS-PEG_5K-FA，得叶酸接枝比不同的金纳米探针；

S4：选取特定的肿瘤细胞，将步骤S3制备的金纳米探针进行靶向性验证和摄取率对比试验，以兼顾分散性和胞吞率为条件，筛选出具有最优叶酸接枝比的金纳米探针。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：取新配制的HAuCl₄溶液加入超纯水稀释，然后，取新制备的胶体银纳米粒子经离心、洗涤、重悬后逐滴加入稀释后的HAuCl₄溶液中，立即混匀，溶液颜色由亮黄色迅速变为浅灰色，紧接着加入抗坏血酸溶液，混合均匀，静置，即得呈淡蓝色、内核中空及表面刺突状的金纳米粒子。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：将叶酸溶解于二甲基亚砜溶液中，加入1-乙基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺，混合均匀得混合液；将该混合液在室温黑暗条件下活化反应一段时间；将HS-PEG_5K-NH₂粉末加入上述叶酸混合溶液，使氨基与叶酸分子中的羧基反应，室温搅拌过夜，该混合溶液经透析、离心、收集上清液、冻干成粉末状，即得巯基聚乙二醇修饰的叶酸靶向分子HS-PEG_5K-FA。

4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述叶酸、1-乙基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺和N-羟基琥珀酰亚胺的反应物摩尔比为1：10：20。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中的肿瘤细胞为4T1乳腺癌细胞。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S4中的最优叶酸接枝比为20％。

7.由上述任一权利要求所述制备方法制备的具有最优叶酸接枝比的金纳米探针。