[发明专利]维生素k2的降压作用

权利要求书

1.一种维生素k2的降压作用，其特征在于：所述维生素k2的降压作用包括选取实验动物：SPF级C57BL/6J小鼠，雄性，体质量23±2g，购买自广州中医药大学实验动物中心(实验单位许可证号：SYXK(粤)2017-0174)，(小鼠许可证号：SCXK(粤)2018-0034)，予以自由饮食和饮水10天后，开始实验，该维生素k2的降压证明方法包括如下步骤：

(1)动物分组：将野生型C57BL/6小鼠按照随机数表分组法分为正常组，高盐组，高盐+VK2组，每组8只；

(2)模型构建：野生型C57BL/6小鼠，8％高盐诱导4周复制高盐诱导的高血压小鼠模型；

(3)尾动脉测压法，观察小鼠血压变化：每周下午同一时间通过Blood Pressure 2000对所有小鼠的血压进行测量，取平均10次测量均值；

(4)酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测相关细胞因子NO、VEGF、Ang I、ET-1的表达：实验开始4周后，杀鼠，取血清，检测。操作步骤方法按照试剂盒说明书进行1.标准品的加样：设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；2.加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔，在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀；3.加酶：每孔加入酶标试剂100μl，空白孔除外；4.温育：用封板膜封板后置37℃温育60分钟；5.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用；6.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干；7.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟；8.终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)；9.测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)，测定应在加终止液后15分钟以内进行；

(5)统计分析：所有数据使用表示，用SPSS19.0统计分析，组间使用t检验，各组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05有统计学意义；

(6)得出结论：高盐可是小鼠血压升高，Vk2表达下降，并且Vk2阻滞高盐诱导的小鼠血压升高及且具有保护内皮细胞因子的作用，VK2防治高血压病的功能。

2.根据权利要求1所述的维生素k2的降压作用，其特征在于：所述小鼠的饲养饲料为：1、8％高盐饲料：代码(LAD0011HF8)购买自南通特洛菲饲料科技有限公司(生产许可证号：苏饲证(2014)06092)，经南通市迈克尔辐照有限公司(辐照安全许可证：国环辐证[00048])辐照灭菌(灭菌批号：19072705)；2、8％高盐饲料+0.036％维生素k2饲料：购买自自南通特洛菲饲料科技有限公司(生产许可证号：苏饲证(2014)06092)，经南通市迈克尔辐照有限公司(辐照安全许可证：国环辐证[00048])辐照灭菌(灭菌批号：19072705)；维生素k2购买自卫材(中国)药业有限公司(进口药品注册证号：H20100462)。