[发明专利]基于双金属MOF纳米类氧化酶的磷酸根比色检测法

权利要求书

1.一种基于Treated-UiO-66-Ce/Zr纳米类氧化酶的磷酸根比色检测法，其特征在于，步骤如下：

1）分别于5mL离心管中加入不同浓度的磷酸根和0.267mL 1 mg/mL Treated-UiO-66-Ce/Zr 纳米类氧化酶，反应1～30min；

2）再向混合液中依次加入0.1 mL 5 mM的TMB和0.2 M的pH为4的醋酸盐缓冲液，确定溶液最终总体积为3mL，混匀体系后，反应1～30 min；所述磷酸根在体系内的最终浓度为0.67μM、1.33 μM、2 μM、2.67 μM、3.33 μM、6.67 μM、13.33 μM、20 μM、26.67 μM、33.33 μM、66.67 μM、133.33 μM、200 μM、266.67 μM、333.33 μM、400 μM、466.67 μM、533.33 μM、600μM或666.67 μM；

3）用紫外-可见吸收分光光度计测定混合溶液紫外吸收光谱，记录波长为652nm处的吸光度并绘制以TMB为显色剂的磷酸根浓度-吸光度标准工作曲线；

以ABTS为显色底物，替代步骤2）中的TMB，并重复步骤1）～2），用紫外-可见吸收分光光度计测定吸光度，记录波长为408nm处的吸光度并绘制以ABTS为显色剂的磷酸根浓度-吸光度标准工作曲线；

4）将测量值按照公式A’=A_TMB/A_ABTS进行计算，所得的A’与对应的磷酸根浓度绘制校准后的磷酸根浓度-吸光度标准工作曲线；

5）将待测磷酸根样品按照上述方法用紫外-可见吸收分光光度计分别测定以TMB和ABTS为底物时的吸光度，通过公式A’=A_TMB/A_ABTS计算出待测磷酸根样品的A_TMB/A_ABTS的值，再将该值与标准工作曲线比对，即可获得磷酸根浓度；

其中，步骤1）中所述Treated-UiO-66-Ce/Zr纳米类氧化酶，其制备方法包括如下步骤：

A）将合成所需的锆盐与铈盐均匀混合，然后，依次加入对苯二甲酸、一定体积的调节剂，以DMF为溶剂溶解，充分混匀；其中，对苯二甲酸的摩尔量等于锆盐和铈盐的摩尔量之和，锆盐:铈盐的摩尔比为1mmol:0.1～10mmol；所述调节剂为乙酸、甲酸或苯甲酸、所述调节剂的体积为1～8mL；DMF的体积为10～50mL；

B）将混合溶液置于水热反应器中，在80～150℃温度下反应2～48h，取出产物，用丙酮、乙醇分别淋洗干净，离心干燥，制得双金属有机框架UiO-66-Ce/Zr；

C）配制NaOH和H₂O₂预备液，混合均匀备用；其中，NaOH和H₂O₂的体积比为10:1～25:1，NaOH的浓度为2.5M，H₂O₂的浓度为30 wt%；

D）称取20 mg步骤B）得到的UiO-66-Ce/Zr于4.0 mL去离子水中，超声20min使其分散均匀，加入50μL步骤C）中新鲜配制的预备液，氧化5～60min，得复合物；

E）用去离子水将复合物反复淋洗直至pH呈中性，60℃烘干，收集即可得到Treated-UiO-66-Ce/Zr纳米类氧化酶。

2.根据权利要求1所述基于Treated-UiO-66-Ce/Zr纳米类氧化酶的磷酸根比色检测法，其特征在于：步骤1）中，分别于5mL离心管中加入不同浓度的磷酸根和0.267mL 1 mg/mLTreated-UiO-66-Ce/Zr，反应5min。

3.根据权利要求1所述基于Treated-UiO-66-Ce/Zr纳米类氧化酶的磷酸根比色检测法，其特征在于：步骤2）中，混匀体系后，反应5min。