[发明专利]一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法

说明书

本发明提供了一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法，涉及分析检测技术领域。本发明提供的测定方法包括以下步骤：(1)将硒蛋白样品与盐酸混合，进行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白样品的质量为10～30mg；所述水解的温度为140～170℃，时间为10～40min；(2)调节所述水解液的pH值至6～8，得到前处理液；(3)采用高效液相色谱‑氢化物发生‑原子荧光光谱法对所述前处理液进行测定，得到硒代氨基酸的含量。本发明提供的测定方法采用微波水解硒蛋白，然后通过高效液相色谱‑氢化物发生‑原子荧光光谱法测定硒代氨基酸，测定方法操作简便，节省时间和成本，能够快速、准确地对各类含硒蛋白中的硒代氨基酸进行测定。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法。

背景技术

硒蛋白是生物有机硒的主要存在形式之一，广泛存在于富硒产品原料(硒酵母、硒蛋白粉等)、保健品(富硒蛋白片、胶囊等)及富硒产品中，硒蛋白中硒代氨基酸的检测方法一直是科研工作者研发的热点，其仪器分析方法可用高效液相-电感耦合等离子质谱(HPLC-ICP-MS)、高效液相-氢化物发生原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)等，但样品前处理方法仍然停留在从国外引进的酶水解法上。酶水解的前处理方法操作复杂(需多次加酶、振荡)、时间长(需30多个小时)、成本高(需要购买昂贵的对照品，一个样品分析需几千元)，水解不完全(肽链与硒代氨基酸并存，分子量在20000道尔顿左右)，不适宜广泛采用。

发明内容

有鉴于此，本发明目的在于提供一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法。本发明提供的测定方法采用微波水解硒蛋白，然后通过高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法测定硒代氨基酸，操作简便，节省时间和成本，且测定结果准确可靠。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法，包括以下步骤：

(1)将硒蛋白样品与盐酸混合，进行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白样品的质量为10～30mg；所述水解的温度为140～170℃，时间为10～40min；

(2)调节所述水解液的pH值至6～8，得到前处理液；

(3)采用高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法对所述前处理液进行测定，得到硒代氨基酸的含量。

优选地，所述硒蛋白样品的质量为15～25mg。

优选地，所述硒蛋白样品的质量为20mg。

优选地，所述微波水解的温度为150～160℃。

优选地，所述微波水解的时间为30～40min。

优选地，所述前处理液的pH值为7～8。

优选地，所述高效液相色谱采用的色谱柱为阴离子交换柱。

优选地，所述测定的周期在6min以内。

本发明提供了一种硒蛋白中硒代氨基酸的测定方法，包括以下步骤：(1)将硒蛋白样品与盐酸混合，进行微波水解，得到水解液；所述硒蛋白样品的质量为10～30mg；所述水解的温度为140～170℃，时间为10～40min；(2)调节所述水解液的pH值至6～8，得到前处理液；(3)采用高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法对所述前处理液进行测定，得到硒代氨基酸的含量。本发明提供的测定方法采用微波水解硒蛋白，然后通过高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法(HPLC-HG-AFS)测定硒代氨基酸：硒蛋白经微波水解，分解成硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒甲基-L-硒代半胱氨酸等游离态含硒小分子物质，即硒代氨基酸；水解液调节pH后通过高效液相色谱将其中硒代氨基酸成分分离出来，分离出来的硒代氨基酸成分进入氢化物发生装置，被转换成硒化氢(H₂Se)；再由载气(氩气)将氢化物带入原子荧光光谱仪中进行测定。