[发明专利]一种利用甲基磺酸乙酯（EMS）构建大麦突变体库的方法

说明书

本发明公开了一种利用甲基磺酸乙酯构建大麦突变体库的方法，本发明以“苏啤6号”作为诱变对象，通过对比不同浓度EMS处理液在不同诱变时间下的大麦种子发芽率，确定半致死剂量，并用半致死剂量诱变处理大麦种子，调查M₂代的突变频率和突变类型，鉴定M₄代能够稳定遗传的突变体，构建突变体库，获得了叶、茎、穗子、生育期、育性、株高等突变类型，为大麦功能基因组学研究创制了丰富的材料，同时部分有益突变可直接应用于育种实践。

技术领域

本发明属于农作物诱变育种技术领域，涉及一种利用甲基磺酸乙酯构建辣椒突变体库的方法。

背景技术

大麦(Hordeum vulgare L.)是世界上四大禾谷类作物之一，具有生育期短、抗病、耐逆(耐旱、耐盐碱、耐贫瘠)等特点，对气候环境适应性较广泛；大麦主要用途有饲料、麦芽啤酒、食粮及工业原料等，并且是青藏高海拔地区最主要的粮食作物。大麦是二倍体自花授粉作物，染色体数为2n＝2x＝14，基因组大小为5.1Gb，2012年和2017年已公布了大麦基因组图谱。大麦具有遗传背景简单，遗传转化相对容易的特点，是麦类作物功能基因组研究的重要模式植物。

突变体库的创建是植物功能基因组学研究的重要基础，目前在拟南芥、水稻等模式作物上均已构建了饱和的突变体库，并利用突变体材料，已克隆了大量的功能基因。突变体库的构建还可以创造新的种质资源，丰富品种的遗传多样性，为新品种选育提供材料基础。甲基磺酸乙酯(EMS)化学诱变技术是构建植物突变体库的重要方法之一，EMS诱变具有诱变效率高，多为点突变，染色体畸变率较低等优点，所以被广泛应用于各种作物突变体库的构建。不同作物各种突变体的获得为作物功能基因的克隆及验证提供了丰富的材料基础。跟拟南芥、水稻、小麦相比，大麦突变库的构建还远没有达到饱和状态，需要构建新的突变体库来补充大麦功能基因组学研究，本研究旨在利用抗黄花叶病的优质大麦品种苏啤6号构建大麦突变体库，为大麦功能基因组学研究和遗传育种提供新突变体材料。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种利用甲基磺酸乙酯(EMS)构建大麦突变体库的方法，利用该方法可以获得多种类型突变体，为大麦功能基因组学研究创制丰富的材料，同时筛选出有利突变直接应用于育种实践。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种利用甲基磺酸乙酯构建大麦突变体库的方法，包括以下操作：

1)将饱满的大麦干种子于0.2mol/L的磷酸缓冲液中浸泡1h，浸种期间不断搅拌；浸种结束后取出大麦种子并吸干表面水分；

2)以不同浓度(0.5％、0.7％、0.9％、1.1％)、pH为7.0的甲基磺酸乙酯溶液为诱变处理剂；将100粒大麦种子100ml的诱变处理剂中，于室温条件下恒温振荡处理8～14h进行诱变处理；

3)诱变处理完成后将大麦种子取出并清洗干净，放于铺有滤纸的培养皿中，在26℃培养箱中培养7天；同时以未诱变处理的大麦种子同样处理作为对照；

以胚根的长度不短于种子长度的一半为发芽标准，统计大麦种子的发芽数，并计算发芽率和相对发芽率：

发芽率＝(发芽数/供试种子数)×100％

相对发芽率(％)＝(诱变处理的发芽率/对照的发芽率)×100％；

以相对发芽率在45～55％的诱变处理为最适诱变处理；

4)对5000-10000粒大麦种子，利用最适诱变处理浓度与时间进行EMS诱变处理，诱变结束后就，将种子点播于试验田间，记为M₁代，正常田间管理，种子成熟后分单株收种，收获的种子记为M₂代；