[发明专利]一种分泌抗大黄鱼免疫球蛋白T单克隆抗体的杂交瘤细胞株

说明书

本发明公开了一种分泌抗大黄鱼IgT单克隆抗体的杂交瘤细胞株IgT‑6，保藏号为：CCTCC NO:C2019215。本发明以纯化的重组大黄鱼IgT重链胞外区蛋白抗原四次免疫BALB/C小鼠后；将针对大黄鱼IgT抗体效价最高的小鼠取脾细胞，与SP2/0骨髓细胞进行融合，筛选获得抗大黄鱼IgT单克隆抗体的杂交瘤细胞株IgT‑6。用本发明方法制备获得的单克隆抗体IgT‑6具有特异性强、效价高、稳定性好等特点，可用于大黄鱼疾病的诊断和疫苗使用效果的评价，对大黄鱼疾病的研究及防治具有重要理论和现实意义。

技术领域

本发明属于单克隆抗体制备的技术领域，具体涉及一种分泌抗大黄鱼(Larimichthys crocea) IgT单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

背景技术

大黄鱼 (Larimichthys crocea) 是我国特有经济鱼种，也是目前我国海水养殖鱼类产量最高的鱼种，2017年产量超过17万吨（2018中国渔业统计年鉴），被农业部列为八大最具优势的出口水产品之一。随着我国海水养殖业的快速发展，养殖规模不断扩大及养殖环境日益恶化，养殖病害防治问题日益突出，成为水产科研工作者的研究重点。从鱼类自身的免疫能力出发来研究其抵御疫病侵袭的机理，不仅有助于认识脊椎动物免疫系统的进化规律及特点，而且有助于促进鱼类疫苗的研制和发展。鱼类是最早出现免疫球蛋白的脊椎动物，虽然与哺乳动物的免疫系统相比还较原始，但是已经形成包括非特异性免疫反应、抗原特异性的细胞免疫和体液免疫等比较完善的免疫应答系统。

免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig) 是鱼类特异性免疫中关键的分子。IgT则是硬骨鱼类中新近发现的一类免疫球蛋白分子，具有与哺乳动物IgA类似的结构和功能；IgT在肠、皮肤、鳃和鼻黏液中以二聚体形式存在，并通过肠、皮肤或鳃上皮细胞表达的多聚免疫球蛋白受体转运至黏液中，其主要参与鱼类局部黏膜免疫应答（Zhang Y A, Salinas I,and Sunyer J O. Recent findings on the structure and function of teleost IgT[J]. Fish and Shellfish Immunology, 2011, 31: 627-634.）。借助抗大黄鱼IgT单克隆抗体，可进行大黄鱼IgT+ B淋巴细胞分选，将为大黄鱼B淋巴细胞的功能及相关免疫学机制研究奠定基础。此外，鱼类感染病原或接种疫苗后，鱼类黏液中产生针对该抗原的特异性抗体，也可以通过该单克隆抗体进行特异性抗体效价检测（ZHANG Y A, SALINAS I, LI J,et al. IgT, a primitive immunoglobulin class specialized in mucosal immunity[J]. Nature Immunology, 2010, 11(9): 827）。因此，利用抗大黄鱼IgT单克隆抗体，通过检测大黄鱼黏液中该特异性IgT的效价，可进行大黄鱼疾病的诊断和疫苗使用效果的评价，对大黄鱼疾病的研究及防治具有重要理论和现实意义。然而，目前尚未见报道大黄鱼IgT单克隆抗体的研制。

发明内容

本发明的目的在于为了解决利用单克隆抗体研究大黄鱼免疫球蛋白结构与功能，将单克隆抗体用于大黄鱼病原微生物检测，协助鱼病诊断与防治等，提供抗大黄鱼IgT单克隆抗体及其制备方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种抗大黄鱼免疫球蛋白T（IgT）的单克隆抗体杂交瘤细胞株IgT-6，所述杂交瘤细胞株IgT-6已于2019年9月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C2019215，中国典型培养物保藏中心的地址为中国，武汉，武汉大学。

所述杂交瘤细胞株IgT-6和抗大黄鱼IgT单克隆的制备方法按以下步骤实现：

1）制备免疫原-重组大黄鱼IgT蛋白；