[发明专利]花青素合成酶抗原表位肽及其抗体与应用

说明书

本发明提供一种花青素合成酶抗原表位肽、及其融合蛋白和其特异性抗体及其制备方法与应用，所述花青素合成酶抗原表位肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明发掘了一种花青素合成酶ANS抗原表位肽；该抗原表位肽经修饰后经过固相合成并与载体蛋白偶联得到融合蛋白作为人工合成抗原其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；所述人工合成抗原免疫动物经分离纯化得到本发明的花青素合成酶特异性抗体，该抗体具有特异性强、灵敏度高、准确性高、操作简便、结果直观和成本低廉等优点。且制备方法操作简单，具有工业化生产的可行性。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，尤其涉及一种花青素合成酶抗原表位肽、融合蛋白、花青素合成酶特异性抗体及其制备方法与应用。

背景技术

特种有色作物由于其高花青素特征既富含营养又具保健功能，恰好符合大众所追求的“绿色食品”要求。因此，研究植物色素合成途径关键酶可以为植物色素积累机制提供基础生理和分子研究支持，奠定开发高花青素类型作物种质资源的基础。

植物色素生物合成需要类黄酮途径相关酶的结构基因。其中花青素合成酶(ANS)是从“无色→有色”过程关键酶。ANS催化无色的原花色素氧化产生有色的花青素，生成途径中第一个“有色”化合物。现今ANS基因已在水稻、拟南芥、非洲菊等多种植物中克隆得到。相关研究表明，一些植物ANS基因表达与花青素和黄酮醇物质积累量呈正相关，表明ANS在色素生物合成中存在潜在作用。

由于蛋白质家族的成员众多，所以对植物中花色苷生物合成关键酶分析鉴定主要运用单向/双向电泳技术和液相色谱联合质谱技术。其鉴定仪器贵鉴定技术过程复杂并且繁琐，而在多克隆抗体制备过程中由于多个抗原决定簇的存在，重组蛋白的表达和纯化过程中不可避免的会掺入一些杂蛋白，制备的抗体仍有可能存在交叉反应，从而影响抗体的特异性。

发明内容

本发明的目的在于提供了一种花青素合成酶抗原表位肽、花青素合成酶特异性抗体及其制备方法与应用，本发明发掘了一种花青素合成酶抗原表位肽；该抗原表位肽经修饰后经过固相合成并与载体蛋白偶联得到融合蛋白作为人工合成抗原；所述人工合成抗原免疫动物经分离纯化得到本发明的花青素合成酶特异性抗体，该抗体具有很高的灵敏性和特异性。

本发明是这样实现的：

本发明目的之一在于提供一种花青素合成酶抗原表位肽，其氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

所述的花青素合成酶抗原表位肽可直接通过公司合成得到；或通过构建含有所述氨基酸序列所对应的核苷酸的表达载体，然后将所述表达载体转染进宿主细胞表达得到所述的花青素合成酶抗原表位肽。

本发明的目的之二在于提供一种融合蛋白，所述融合蛋白包括所述的花青素合成酶ANS抗原表位肽和任选的标签序列。

优选地，所述的标签序列为在所述的花青素合成酶抗原表位肽的C端增加的1个半胱氨酸(其氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示)。

优选地，所述标签序列半胱氨酸Cys上的巯基通过偶联剂偶联有载体蛋白。更为优选地，所述载体蛋白为钥孔戚血兰蛋白，所述偶联剂为琥珀酰亚胺-4-环已烷-1-碳酸酯。

所述的融合蛋白可直接通过公司合成得到或先合成花青素合成酶抗原表位肽经改造后得到；或通过构建含有所述融合蛋白所对应的核苷酸的表达载体，然后将所述表达载体转染进宿主细胞表达得到所述的融合蛋白。

本发明的目的之三在于提供一种花青素合成酶特异性抗体，所述抗体特异性的结合所述的抗原表位肽或所述的融合蛋白，并且所述抗体能够特异性地结合天然的花青素合成酶蛋白和/或突变的花青素合成酶蛋白。

本发明的目的之四在于提供一种花青素合成酶特异性抗体的制备方法，将所述的抗原表位肽或所述的融合蛋白免疫动物，取血清从中分离纯化得到的多克隆抗体即为该花青素合成酶特异性抗体。