[发明专利]一种腺苷七肽及其制备菌株

说明书

本发明涉及一种氨基酸序列为MATINAN的腺苷七肽，该七肽具有较强的耐热、耐胃蛋白酶、胰蛋白酶及糜蛋白酶的生物学特性，稳定性高，且抑菌活性强。本发明还提供了一种获得耐热耐蛋白酶菌株的高通量筛选方法，筛选出一种能产生上述七肽的约氏乳杆菌株，该约氏乳杆菌株于2019年10月16日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行了保藏，保藏号为：CGMCC No.18695，具有抗逆性好、分泌量高的优势，成本低，为畜牧饲料、化妆品、保健品等领域产业化大规模制备腺苷七肽奠定了重要的基础。

技术领域

本发明涉及一种腺苷七肽及其产生菌株，属于生物技术领域。

技术背景

约氏乳杆菌是一种安全无害的益生菌，可以用来发酵饲料、食品以及作为益生菌调节肠道健康，提高动物或人体免疫力。抗菌肽是生物体产生的与宿主防御和先天免疫相关的小分子多肽，一般由5-50个氨基酸组成。抗菌肽具有抑制杀灭病原体、促进免疫、促进伤口愈合和粘膜防御等功能。

腺苷七肽(又名杆菌七肽、microcin C7肽)是由肠杆菌属、乳杆菌属等微生物分泌的一种细菌素类抗菌肽，由7个氨基酸残基组成，C端通过N-酰磷酰胺键与5'-磷酸腺苷(AMP)所结合形成小分子量抗菌肽，具有抗菌能力强，调节免疫的功能，是潜在的抗生素替代品(冉仁森，中国科学院大学，硕士学位论文，2017)。腺苷七肽的N端的蛋氨酸(Met)残基和C端的谷氨酰胺(Asn)为其保守序列，不同的微生物分泌的杆菌七肽中间的五个氨基酸残基有所差异，抗菌效果和抗逆性也有所不同。其中，约氏乳杆菌(Lactococcus johnsoniiNCC533)分泌的腺苷七肽序列为MHRIMKN(Olga Bantysh，Mbio，2014 Volume 5 Issue 3)。野生型约氏乳杆菌分泌的腺苷七肽对胃蛋白酶、胰蛋白酶以及热处理耐受性差，分泌量少，故用野生型约氏乳杆菌生产腺苷七肽安全性好，但生物稳定性差，且生产成本高，不能实现大规模产业化。

传统筛选目的菌株的方法工作量大、耗时长，专利CN 109400685 A采用Quickchange方法进行腺苷七肽改造，需要宿主是大肠杆菌，且仅能筛选到耐受胰蛋白酶的菌株，无法对约氏乳杆菌基因进行快速改造。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有较高耐热性、耐肠液和胃液效果的腺苷七肽，本发明的目的是通过以下措施实现的：

一种腺苷七肽，其特征在于，所述肽的氨基酸序列为MATINAN。

上述腺苷七肽经100IU//ml胃蛋白酶或/和100IU/ml胰蛋白处理后或/和100IU/ml糜蛋白和/或95℃高温处理后，含量下降低于10.0％，抑菌效果下降低于10.0％；与野生型七肽或其他氨基酸序列的七肽相比，具有较强的耐热、耐胃蛋白酶和胰蛋白酶的生物学特性，且抑菌活性强。

本发明的另一目的是提供一种菌株，该菌株可用于制备上述腺苷七肽，且能够实现高产。

本发明的目的是通过以下措施实现的：

一种约氏乳杆菌株(Lactobacillus johnsonii)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(北京市朝阳区)，保藏日期是2019年10月16日，保藏号为CGMCCNo.18695。

上述菌株，用于制备上述腺苷七肽。

上述菌株，经100IU//ml胃蛋白酶或/和100IU/ml胰蛋白处理后或/和100IU/ml糜蛋白和/或95℃高温处理后，发酵液中腺苷七肽含量下降低于10.0％，抑菌效果下降低于10.0％。

本发明的还提供了一种上述菌株的高通量筛选方法，包括以下措施：

一种上述菌株的高通量筛选方法，采用胃蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶作为筛选试剂，筛选时间20-40min。

上述高通量筛选方法，筛选温度为95℃，筛选时间为10-20min。