[发明专利]敲减CAS的乳腺癌细胞模型及利用其的细胞学实验

权利要求书

1.一种敲减CAS的乳腺癌细胞模型，其特征在于，利用慢病毒转染技术敲减Luminal A型乳腺癌细胞系MCF-7的CAS构建而成。

2.一种如权利要求1所述的敲减CAS的乳腺癌细胞模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将乳腺癌细胞MCF-7以2×10⁵种于6孔板中，次日细胞贴壁后，按照病毒使用说明，每孔加入4uL慢病毒和终浓度5ug/mL polybrene，48h后加入嘌呤霉素筛选，一周后构建成稳定敲减CAS的乳腺癌细胞模型。

3.一种基于如权利要求1所述的敲减CAS的乳腺癌细胞模型的细胞学实验，其特征在于，包括细胞迁移和侵袭实验、细胞活力实验，其中，所述细胞迁移和侵袭实验包括如下步骤：

（1-1）将权利要求1所述的细胞用无血清培养基重悬后以一定细胞数量接种于CorningCell Culture Insert/Corning Matrigel Matrix 的Transwell中，24孔板下室添加含10%FBS的培养基；

（1-2）放置于37℃、5% CO₂培养箱中培养24～48小时后，4%PFA固定10分钟，PBS清洗两遍后，苏木精染色10分钟，洗去Insert /Transwell内侧细胞，于显微镜下拍照并统计穿过Insert /Transwell的细胞数量，完成细胞迁移和侵袭实验。

4.根据权利要求3所述的细胞学实验，其特征在于，所述细胞活力实验包括如下步骤：

（2-1）权利要求1所述的细胞以2000个细胞/孔的密度，接种于培养板中，于37℃、5%CO₂ 培养箱中培养24小时后，加入CCK8工作液，CO₂ 箱温育1-2小时；

（2-2）酶标仪检测OD值，比较细胞的活力情况，完成细胞活力实验。

5.一种敲减CAS的乳腺癌细胞模型的转录组测序，其特征在于，包括如下步骤：收集敲减CAS 后6天的对照组细胞系MCF-7-LV-U6和实验组细胞系MCF-7-shCAS，保存于TRIZOL 置于-80度冰箱，提总RNA进行质量检测，选取260/280在1.8-2.0之间且琼脂糖凝胶电泳检测28S:18S至少大于1.8的样本，外送至测序公司，由测序公司进行构建文库、上机测序等步骤，测序完成后将获取的测序数据发回，进行解读及后续分析。