[发明专利]一种高效钠升级液相色谱柱的分压填充方法

说明书

一种高效钠升级液相色谱柱的分压填充方法，解决了钠升级色谱柱价格昂贵，色谱柱的填充效率较低的问题。其包括如下步骤：a)准备聚酰亚胺石英毛细管一根；b)采用拉针仪将聚酰亚胺石英毛细管一端拉细至5um，拉出的聚酰亚胺石英毛细管的针尖平滑；c)色谱柱填充；d)聚酰亚胺石英毛细管色谱柱针尖处理；e)色谱柱组装，将聚酰亚胺石英毛细管色谱柱与四通阀完成组装；f)填充液置换，利用钠升级液相色谱，将填充色谱柱的甲醇利用流动相进行置换后置于洁净干燥处保存。本发明填充钠升级色谱柱的成本在80元‑150元之间，极大程度上降低了成本，且分离效率较高。

技术领域

本发明涉及液相色谱柱填充技术领域，尤其是涉及一种高效钠升级液相色谱柱的分压填充方法。

背景技术

钠升级液相色谱与高分辨质谱联用是目前蛋白组学常用的技术手段。其中色谱柱的柱效是决定蛋白鉴定质量的一个关键指标。目前商业化的钠升级色谱柱技术成熟。但由于不同实验的需求以及蛋白制样技术的不同，对于色谱柱的填料以及填充方法的多样性提出了新的要求。蛋白组学实验样品群体大，色谱柱稳定性以及连续性至关重要，因此在可控范围内保证自天柱的经济性以及填充效果效率是必要的。现在市场上商品化钠升级色谱柱价格大多在8000元～12000元一根。

发明内容

针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本发明提供一种高效钠升级液相色谱柱的分压填充方法，有效的解决了钠升级色谱柱柱价格昂贵，色谱柱的填充效率较低的问题。

为实现上述目的，本发明包括如下步骤：a)准备聚酰亚胺石英毛细管一根；

b)采用拉针仪将聚酰亚胺石英毛细管一端拉细至5um，拉出的聚酰亚胺石英毛细管的针尖平滑；

c)色谱柱填充，1、利用甲醇混合色谱柱填料(以C18填料为例)，2、连接填充装置，将拉制好的聚酰亚胺石英毛细管色谱柱固定在填充装置上，3、分压填充设置：观察聚酰亚胺石英毛细管针尖悬浊液外溢状态，确保针尖正常无破损，填充开始时，设定压力值4MPa，填充在聚酰亚胺石英毛细管全柱长的1/3时，设定压力值4.2MPa，填充在全柱长的2/3时，设定压力值4.5MPa，直至填充完毕，填充完毕后，关掉氮气阀，待填充装置自动泄压后取下聚酰亚胺石英毛线管色谱柱；

d)聚酰亚胺石英毛细管色谱柱针尖处理，利用乙腈浸泡聚酰亚胺石英毛细管色谱柱针尖30分钟，取出浸泡好的聚酰亚胺石英毛细管色谱柱的针尖，用无尘纸擦洗干净；

e)色谱柱组装，将聚酰亚胺石英毛细管色谱柱与四通阀完成组装；

f)填充液置换，利用钠升级液相色谱，将填充色谱柱的甲醇利用流动相进行置换后置于洁净干燥处保存。

聚酰亚胺石英毛细管本发明填充钠升级色谱柱的成本在80元-150元之间，极大程度上降低了成本，且分离效率较高，与质谱联用时离子化效率高。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：

图1为本发明透视镜下观察的针尖效果。

图2为本发明色谱组装示意图。

图3为本发明色谱柱柱效检测示意图

具体实施方式

下面结合附图1-3对本发明的具体实施方式做进一步详细说明。

由图1-3可知，本发明包括如下步骤：a)准备聚酰亚胺石英毛细管一根；

目前常用的聚酰亚胺石英毛细管的规格为外径360um，内径有75um、100um、150um三种规格。

b)采用拉针仪将聚酰亚胺石英毛细管一端拉细至5um，拉出的聚酰亚胺石英毛细管的针尖平滑；