[发明专利]检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条、制备方法及其应用

权利要求书

1.检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条，其特征在于：它包括底板，底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上设有横向质控线和检测线，所述质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，所述检测线位于质控线的下方，所述检测线上包被有二乙酰镳草镰刀菌烯醇- 卵清白蛋白偶联物；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体；所述的抗二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体由保藏编号为CCTCCNO.C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7 分泌产生。

2.根据权利要求1所述的检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条，其特征在于：所述的吸水垫长16 ～ 18 mm，宽3 ～ 4 mm，检测垫长18 ～ 30 mm，宽3 ～4 mm ；金标垫长10 ～ 12 mm，宽3 ～ 4 mm ；样品垫长12 ～ 15 mm，宽3 ～ 4 mm，相邻各垫的交叠长度为1 ～ 3 mm。

3.根据权利要求1 所述的检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15 ～ 20mm，所述检测线与质控线的间距为5 ～7mm。

4.根据权利要求1 所述的检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条，其特征在于：所述检测线上每厘米所需要的二乙酰镳草镰刀菌烯醇- 卵清白蛋白偶联物的包被量为100 ～300ng；质控线上每厘米所需要的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为50 ～ 200ng。

5.根据权利要求1 所述的检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条，其特征在于：所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15 ～ 20 nm；所述金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体的用量为100 ～ 200 ng。

6.权利要求1所述的检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于：它包括以下步骤：

(1) 吸水垫的制备

将吸水纸剪裁即得吸水垫；

(2) 检测垫的制备

检测线的包被：

将二乙酰镳草镰刀菌烯醇- 卵清白蛋白偶联物用包被缓冲液分别配制成0.25 ～0.5mg/mL 的包被液，用点喷方式将其于硝酸纤维素膜上进行分别包被，得到检测线，然后于37 ～ 40℃条件下干燥30 ～60 分钟；所述包被二乙酰镳草镰刀菌烯醇- 卵清白蛋白偶联物的检测线上每厘米所需要的二乙酰镳草镰刀菌烯醇- 卵清白蛋白偶联物的包被量为100 ～ 300ng；检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15 ～ 20mm；

质控线的包被：

将兔抗鼠多克隆抗体用包被缓冲液配制成0.2 ～ 0.4 mg/mL 的包被液，于距靠近质控线的检测线5 ～ 7 mm 的位置，用点喷方式将其横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线，每厘米质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为50 ～ 200 ng，然后于37 ～ 40 ℃条件下干燥1 ～ 2 小时；

(3) 样品垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37 ～ 40 ℃条件下干燥6 ～ 10 小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；

(4) 金标垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37 ～ 40℃条件下干燥6 ～ 10 小时，用点喷方式向已干燥的玻璃纤维膜上横向喷涂纳米金标记的抗二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体溶液，其中：每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体的用量为100 ～ 200 ng，然后真空冷冻干燥2 ～4 小时，置干燥器中室温保存；所述的抗二乙酰镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO.C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7 分泌产生；

(5) 试纸条的组装

在底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，交叠长度为1 ～ 3mm，即得检测二乙酰镳草镰刀菌烯醇污染的免疫层析试纸条。