[发明专利]同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素的时间分辨荧光试剂盒

说明书

本发明公开了同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素的时间分辨荧光试剂盒。包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素单克隆抗体的样品反应瓶，所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条的一面从上至下依次设置吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫于连接处交叠相接，检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下横向设有质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线个数为三条，分别包被各毒素‑蛋白偶联物。能实现对二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素三种真菌毒素的快速、同步检测。

技术领域

本发明提供了真菌毒素时间分辨荧光免疫层析试剂盒，具体为一种同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇(蛇形毒素)、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素混合污染的时间分辨荧光试剂盒及制备方法。

背景技术

二乙酸镳草镰刀菌烯醇(4,15-diacetoxyscirpenol,DAS)是一种由镳草镰刀菌、木贼镰刀菌产生的单端孢霉烯族毒素。DAS主要污染谷物和饲料，它对动物骨髓、大脑、心脏、淋巴、睾丸、胸腺、神经细胞等有毒害作用，还可引发胃肠炎，抗体减少，眼和体腔水肿等损伤。黄曲霉毒素是一类由黄曲霉(Asperillus flavus)和寄生曲霉(Asperg illusparasiticus)侵染粮油等作物产生的有毒次生代谢产物，主要包括B1、B2、G1、G2、M1、M2六种。黄曲霉毒素B1的毒性为氰化钾的10倍,砒霜的68倍,被世界卫生组织列为一类致癌物。人畜大剂量接触黄曲霉毒素可引起急性中毒死亡，长期小剂量接触可引起免疫抑制，诱发肝、胃、支气管、肾、腺体等多器官癌症。杂色曲霉素(ST)是一种由杂色曲霉(Aspergillusuersicolor)和构巢曲霉(A.nidulans)产生的致癌致畸真菌毒素,是真菌中黄曲霉毒素合成途径的前体。杂色曲霉素因污染含量高而大于黄曲霉毒素的危害性,与地区性肝、胃、食道的致癌致畸有很大的正相关性。二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1和杂色曲霉素在油料作物中常造成叠加污染，因此研制一种能同时检测这三类污染物的方便快捷的检测技术非常必要。

目前，上述生物毒素的检测方法主要有液相色谱、气相色谱-质谱联用、液相色谱-质谱联用等仪器分析法。这些仪器分析法稳定性好、灵敏度高、准确性好，但是前处理步骤复杂，样品检测成本高。免疫层析法灵敏度高、操作简单、成本低廉，在抗原抗体特异性反应的基础上，利用硝酸纤维素固定抗原，使层析中游离靶标物与检测线上抗原竞争结合已标记抗体，通过检测线上标记物的量计算样品中靶标物含量。时间分辨荧光免疫分析(TRFICA)利用铕作为高亲和力探针，具有灵敏度高、性质稳定、避免荧光背景的干扰，检测时间短等优点，非常适合开发农药残留快速检测方法。

因此开发一种同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇(蛇形毒素)、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素混合污染的时间分辨荧光试剂盒，具有很大的必要性和十分重要的意义。

发明内容

本发明涉及一种能同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素混合污染的时间分辨荧光试剂盒及制备方法。可同步检测样品中二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1和杂色曲霉素的含量。具有操作简单、检测快速、灵敏度高的特点。

本发明为解决上述技术问题，采用了如下技术方案：

同步检测二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素混合污染的时间分辨荧光试剂盒，包括免疫层析时间分辨荧光试纸条和含有铕标记的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇、黄曲霉毒素B1、杂色曲霉素单克隆抗体的样品反应瓶，所述的免疫层析时间分辨荧光试纸条包括衬板，衬板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫和样品垫，相邻各垫于连接处交叠相接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下横向设有质控线和检测线，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体，检测线位于质控线下方，个数为三条，检测线上分别包被有二乙酸镳草镰刀菌烯醇-牛血清白蛋白偶联物、黄曲霉毒素B1-牛血清白蛋白偶联物和杂色曲霉素-牛血清白蛋白偶联物；所述的抗二乙酸镳草镰刀菌烯醇单克隆抗体为由保藏编号为CCTCC NO:C201881的杂交瘤细胞株DAS5G11E7分泌产生。