[发明专利]D-PAS染色相关试剂在诊断肝脏损伤中的用途

说明书

本发明公开了D‑PAS染色相关试剂在制备用于诊断肝脏损伤的试剂盒中的用途，属于医学领域。其中，所述相关试剂包括淀粉酶、PAS染色相关试剂。利用本发明，可以帮助临床确定患者是否有药物、保健品、环境毒物等接触史，有无染发史等，有助于明确肝脏损伤原因，减少临床误诊、漏诊，提高临床诊治水平。

技术领域

本发明涉及医学领域，具体涉及D-PAS染色相关试剂在诊断肝脏损伤中的用途。

背景技术

典型药物性肝脏损伤患者诊断依据：(1)应用可疑药物史；(2)临床表现及肝脏生化学异常；(3)影像学表现；(4)肝脏病理学表现。一般情况下，上述四点即可明确诊断，但有时需要借助肝脏病理染色法辅助，常规的染色方法包括：

(1)苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining)，简称HE染色法，苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。

(2)Masson三色染色：又称马松染色，是经典结缔组织染色方法，胶原纤维呈蓝色(被苯胺蓝所染)或绿色(被亮绿所染)，肌纤维呈红色(被酸性品红和丽春红所染)，I型、III型胶原呈绿色。

(3)网状纤维染色：又称嗜银纤维，常用Gordon Sweet或渡边改良法。网状纤维黑色，核红色。网状纤维主要成分是III型胶原蛋白，可反映肝脏病变网状支架形态，肝细胞的脱失、增生、结节性病变、肿瘤以及纤维化程度。

(4)红氨酸法：显示肝内铜颗粒沉积部位及程度，呈黑绿色，用于Wilson病诊断，此外慢性肝病时，也可见铜染色阳性。

(5)铁染色(普鲁士蓝染色)：显示肝内铁颗粒沉积部位、程度，呈蓝色，显示铁颗粒，用于诊断血色病、酒精性肝病和陈旧性出血灶。

其他免疫染色：乙型肝炎病毒标志物：HBsAg和HBcAg；胆管染色CK19。

临床常见一些不明原因肝脏损伤患者，多查体或因其他疾病就诊发现肝功能异常，通过血清免疫学检查可除外常见的嗜肝或非嗜肝病毒感染、酒精或非酒精性脂肪性肝病、遗传代谢性肝病等，且患者不具备上述四点依据，上述常规肝脏病理染色法也不能发现特异性改变。

发明内容

为了解决上述技术问题，发明人进行了大量的探索，意外地发现，在肝脏病理常规染色基础上，加用D-PAS染色可清楚显示中央静脉周围和/或汇管区的品红色吞噬细胞，可提示近期曾有急性肝细胞坏死。从而完成本发明。

本发明一方面提供了D-PAS染色相关试剂在制备用于诊断肝脏损伤的试剂盒中的用途，所述相关试剂包括淀粉酶、PAS染色相关试剂。

糖原染色是病理学中常规的染色方法之一，该法常用来显示糖原和其他多糖，该染色液不仅能够显示糖原，还能显示中性黏液性物质和某些酸性物质。

在本发明的一些实施方案中，所述淀粉酶的浓度为1％。

在本发明的另一些实施方案中，所述PAS染色相关试剂包括过碘酸和Shiff试剂。

过碘酸(又称高碘酸)是一种强氧化剂，它能氧化糖类及有关物质中的1，2-二乙醇基，使之变为二醛，醛与Schiff试剂能结合成一种口红化合物，产生紫红色。

在本发明的一些具体实施方案中，所述Shiff试剂的配制方法为：1g碱性品红溶于200mL煮沸的蒸馏水中，摇荡5分钟；冷却至60℃左右，过滤，并向滤液中入1mol/L HCl20mL，混匀；冷至25℃时，加2g偏重亚硫酸钠(Na₂S₂O₅)；置于带塞的棕色玻璃瓶中，放暗处24小时，保存于冰箱中。

在本发明的一些实施方案中，所述试剂盒进一步包括肝脏病理常规染色试剂。