[发明专利]一株高产热稳定胰蛋白酶的链霉菌及其应用

说明书

本发明属于微生物或酶工程领域，具体涉及一株高产热稳定胰蛋白酶的链霉菌及其应用。所述菌株具体为链霉菌(Streptomyces sp.)LDE‑79，保藏号为CGMCC No.18646。链霉菌LDE‑79发酵得到的胰蛋白酶最适pH范围为7.5‑9.0，最适pH为8.0，最适作用温度范围为35℃‑60℃，最适温度为50℃。并且在55℃保温1h后剩余酶活为92％，保温2h后剩余酶活为85％，具有显著的耐热性，可广泛应用到高温工业生产中，大大地拓宽了胰蛋白酶的应用范围，增加了胰蛋白酶的应用价值。

技术领域：

本发明属于微生物或酶工程领域，具体涉及一株高产热稳定胰蛋白酶的链霉菌及其应用。

背景技术：

胰蛋白酶(Trypsin，EC 3.4.21.4)属于丝氨酸蛋白酶类，有丝氨酸蛋白酶的典型特征，即具备由组氨酸、天冬氨酸和丝氨酸氨基酸残基所组成的催化三联体。而胰蛋白酶能通过专一的断开精氨酸或赖氨酸羧基端肽键来降解多肽链，并能激活其他胰腺中的酶原。由于其最适催化作用pH在7.0以上，所以胰蛋白酶是一种碱性蛋白酶。胰蛋白酶是一种工业上常用蛋白酶，在医药领域、皮革加工、农业生产及食品加工等领域均发挥着重要应用。

目前，被广泛应用的商品化胰蛋白酶多数来自于动物胰腺，但诸多的缺陷或限制制约了其的应用。从动物的胰腺中提取胰蛋白酶，是胰腺提取胰岛素的副产品，但随着胰岛素的基因工程化生产，使单纯从胰腺中提取获取胰蛋白酶的成本大大增加。

另外，胰腺中还含有较复杂的消化酶系，不可避免地降低了胰蛋白酶的纯度(例如胰凝乳蛋白酶等)，或者需要通过增加成本进行纯化。动物源胰蛋白酶还存在携带动物性病毒的隐患，异味重以及宗教等限制性问题，从而在一定程度上阻碍其在商品化中的应用。与动物源胰蛋白酶相比，由于微生物生长迅速、培养成本低，能在相对较短的时间合成大量目标产物，使微生物源胰蛋白酶有着无法比拟的优势。此外，微生物胰蛋白酶在性质上也呈现出多样性，拓宽了胰蛋白酶的应用领域。并且还可通过基因工程技术，在分子尺度改善酶的产量与催化特性。

然而，目前微生物源胰蛋白酶由于催化活力不高和发酵水平低等限制因素，使其并没有很好的工业中得到应用。因此所以选育一株高产胰蛋白酶的菌株和发酵方法，使其发酵产品耐热性良好，催化作用pH范围较宽，生产成本较低廉，能够大规模机械化生产等具有极大的意义。

发明内容：

本发明的目的是提供一株高产热稳定胰蛋白酶的链霉菌(Streptomyces sp.)LDE-79及其发酵产酶方法，在确保链霉菌(Streptomyces sp.)LDE-79发酵高产胰蛋白酶稳定性的同时，胰蛋白酶又具备优良的耐热特性。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一株高产胰蛋白酶的链霉菌，所述菌株具体为链霉菌(Streptomyces sp.)LDE-79，该菌株己于2019年10月09日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮编100101，保藏号为CGMCC No.18646。

所述链霉菌(Streptomyces sp.)LDE-79是原始菌株LDE-A7通过常温常压等离子体诱变选育获得的一株高产热稳定胰蛋白酶的突变菌株LDE-79；菌落形态特征：菌落圆形、菌落较厚、菌丝体为灰白色、褶皱；中央凸起，粉质状。

本发明的另一目的在于提供上述链霉菌(Streptomyces sp.)LDE-79的发酵生产胰蛋白酶的方法，主要包括以下步骤：