[发明专利]一种环孢霉素全血样本的前处理剂及其使用方法

说明书

本发明提供了一种环孢霉素全血样本的前处理剂，属于免疫抑制剂治疗药物浓度检测技术领域，所述前处理剂以磷酸盐缓冲液为溶剂，包括：质量体积分数为0.1～1％的脱氧胆酸钠、质量体积分数为1～5％的5‑磺基水杨酸和质量体积分数为0.1～1％的邻甲氧基苯甲酸；所述前处理剂的pH值为6～8。本发明提供的前处理剂无挥发性，对抗体和酶的活性影响小。

技术领域

本发明属于免疫抑制剂治疗药物浓度检测技术领域，尤其涉及一种环孢霉素全血样本的前处理剂及其使用方法。

背景技术

环孢霉素(cyclosporine，CsA)是一种高效的免疫抑制剂，环孢霉素能够选择性地和可逆性地抑制T-辅助细胞产生生长因子，因而对免疫系统显示相对较高的治疗效能。近年来它被越来越多的用于心、肺、肝、肾、胰及骨髓等器官的移植，并明显提高了移植器官的存活率。然而，CsA具有一些值得重视的副作用，如肾毒性、肝毒性以及增加产生淋巴瘤的危险等。此外，肾毒性在大多数病人呈现剂量相关性。由于不同病人的疾病状态、器官移植类型及年龄不同，因此对所给出的剂量在药物的吸收和代谢速率上存在很大的个体差异。

因此为使环孢霉素产生最佳的免疫抑制作用，减小毒副作用，对器官移植后接受环孢霉素治疗的病人进行药物监测及药物动力学研究是很有意义的。

目前，国内外监测环孢霉素药物浓度的方法，主要有微粒子化学发光法(雅培)，均相酶免法(西门子)，电化学发光法(罗氏)，质谱法。人体内，环孢霉素与多种血浆蛋白结合，且有一部分存在与红细胞内，因此，环孢霉素的检测必须采用全血样本。上述的这些检测方法都需要进行样本的前处理。其中质谱法的前处理，往往采用高浓度的有机溶剂，如甲醇，乙腈等，配合高浓度的硫酸锌去沉淀全血蛋白，但是该前处理剂因含有大量有机溶剂和高浓度硫酸锌，会严重损伤抗体和酶的活性，因此不能适用于环孢霉素免疫测定试剂。雅培的微粒子化学发光法采用表面活性剂进行溶血，再甲醇和硫酸锌的混合液沉淀蛋白，再用EDTA中和多余的硫酸锌，均需要多步处理，且处理后不能完全中和的金属离子对抗体和酶依然存在一定的活性损伤。另外，甲醇存在挥发性，对人体有害，且长期使用甲醇的挥发会导致试剂效果下降。因此，市场上急需简单快速，兼容免疫检测试剂的环孢霉素样本前处理剂。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种环孢霉素全血样本的前处理剂及其使用方法，本发明提供的前处理剂无挥发性，对抗体和酶的活性影响小。

为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种环孢霉素全血样本的前处理剂，所述前处理剂以磷酸盐缓冲液为溶剂，包括：质量体积分数为0.1～1％的脱氧胆酸钠、质量体积分数为1～5％的5-磺基水杨酸和质量体积分数为0.1～1％的邻甲氧基苯甲酸；

所述前处理剂的pH值为6～8。

优选的，包括质量体积分数为0.3～0.5％的脱氧胆酸钠。

优选的，包括质量体积分数为2～4％的5-磺基水杨酸。

优选的，包括质量体积分数为0.2～0.5％的邻甲氧基苯甲酸。

优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.1～1mol/L。

优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为0.2～0.5mol/L。

优选的，所述前处理剂的pH值为6.5～7.5。

本发明还提供了上述技术方案所述的前处理剂的使用方法，包括：将所述前处理剂与全血样本混合后，将得到的混合物离心，得到的清液为环孢霉素提取清液。

优选的，所述全血样本与前处理剂的体积比为1:0.5～2。

优选的，所述离心的条件包括：所述离心的离心力为9000～11000g，所述离心的时间为5～10min。