[发明专利]一种红细胞处理试剂及其应用

说明书

本发明公开了一种红细胞处理试剂及其应用，所述红细胞处理试剂包括洗涤液、固定液、封闭液和保存液，所述固定液中含有单宁酸和戊二醛，能够用于红细胞模拟物的制备。使用含有单宁酸的固定液，能够使多个体红细胞的MCV分布在处理后变窄，使处理后的RDW值更接近正常人的RDW。该红细胞处理试剂配制简单、使用方便，能够控制红细胞分布宽度和稳定红细胞平均体积，从而提高检测的灵敏度和准确性。

技术领域

本发明涉及生物技术和医学领域，具体涉及一种红细胞处理试剂及其应用。

背景技术

血细胞分析仪经过校准后，为了监控测定结果在长期运行过程中测定结果是否发生漂移，需要开展质量控制。质量控制在临床血常规测定中一直被认为是一种必要的操作程序，各项目的分析结果的准确性在一定程度上取决于：1.选取合适的质控品；2.使用合适的质控规则。过去通常使用新鲜人血作为血细胞分析仪的质控品/校准品，新鲜人血经过参考方法赋值后，在血细胞分析仪进行测定，通过比较靶值与测定值的差异来判断仪器是否需要进行校准。但是，使用参考方法进行赋值过程繁琐，需要耗费大量的人力及时间；同时，目前只有WBC、 RBC、HGB、HCT(PCT)、PLT这5个参数具有国际血液标准化委员会(International Committee for the Standardization of Hematology，ICSH)推荐的参考测量方法，无法监控仪器其他参数的漂移；此外，新鲜血液的参数只能在4个小时内认为是稳定的，如果需要进行日间质控，只能每日重新使用参考方法对新鲜血赋值。随着血常规分析的普及，大多数用户需要同时监控多台血细胞分析仪器的运行状况，甚至需要进行室间比对，不再适合使用新鲜血液作为质量控制物。因此，人们开始研发可以模拟新鲜血液成分的血细胞分析用质控品/校准品。

血细胞分析用质控品/校准品的常规制备思路是：1.将血液中的血浆成分去除；2.使用固定剂处理细胞膜，提高细胞的形态稳定性；3.加入封闭剂(也称为猝灭剂)停止固定反应； 4.加入保存液(也称为人造血清或悬浮介质)，通过调节保存液的加入量来控制各细胞组分的最终浓度。其中，步骤1和4是关键的，而固定及封闭的工艺在部分公开的专利中未使用也能达到目标效果。保存液配方设计的主要目的是避免血细胞由于重力沉降而发生不可逆的聚集，以及避免微生物的生长导致细胞被破坏或干扰测定。此外，为了避免红细胞对白细胞计数的干扰，需要保持红细胞与溶血剂的反应能力，因此，固定剂的用量及处理时间需要严格控制，必要时，对红细胞和白细胞分别处理。

此前公开的专利中，通常通过调节渗透压来改变细胞的大小，然后再使用固定剂使其体积保持稳定。但对于非人红细胞，当细胞体积收缩或膨胀超过30％-50％时，细胞将会过度聚集或者发生溶血。美国专利US 4704364、US 632003、US 3541137、US 4179398等报道了血细胞分析仪用质控品中白细胞、血小板模拟物的制备方法，其中，粒细胞可以使用铰口鲨红细胞进行模拟，单核细胞可以使用火鸡红细胞模拟，淋巴细胞可以使用禽类红细胞模拟，血小板可以使用山羊红细胞进行模拟。美国专利US 3873467通过保存液内的特殊成分使细胞趋向于球形化，而不改变细胞的MCV测定值，抑制了细胞在储存过程中的降解。此外，该保存液提供一种抑制细胞生物活性的液体环境。美国专利US 4777139报道了通过使用少量的二醛类化合物，如甲醛、戊二醛、多聚甲醛等，来固定悬浮的红细胞的形状和大小。但该方法的不足是，所制备的质控品MCV的日间变化需要经过一定的稳定期(平衡时间)后才能到达最小值，该稳定期的长短取决于制备样本的浓度水平。尽管经过该平衡时间后，质控品的红细胞平均体积(MCV)可以在90天内变化范围小于1fL，但不同的平衡时间将使得该方法难以实现生产转化。此外，由于醛类物质会降低红细胞的代谢活性，将降低保存液对细胞的稳定效应。

现有技术的另一个缺陷是，当原料来源于多个个体时，由于不同个体的MCV差异，将有可能导致制备物的红细胞分布宽度(RDW)高于参考范围，或者导致批间质控品RDW值差异较大。为了解决该问题，目前通常在制备前对原料进行初步筛选，选择MCV值接近的原料进行制备。但该过程需要耗费较长时间，且需要损耗部分的原料。

发明内容