[发明专利]一种同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法

说明书

本发明公开了一种同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法，所述六种代谢产物为乌头原碱、准噶尔乌头碱、里奥林、3‑乙酰基‑11‑酮基‑β‑乳香酸、11‑酮基‑β‑乳香酸、蚯御素，所述测定方法包括以下步骤：1)对血浆样品进行前处理，得待测样品溶液；2)向待测样品溶液中加入正离子内标和负离子内标，进行HPLC‑MS/MS检测。本发明首次针对小金制剂在生物体内的六种代谢产物，建立了一种便捷、准确、灵敏、可靠的液质联用含量测定方法，该方法可应用于小金制剂的血清药理学研究，更好地监测药物在体内的药代动力学过程。

技术领域

本发明涉及生物样品中药物代谢产物的含量测定方法，尤其是一种同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法。

背景技术

《中国药典》2010版一部收载了一种具有散结消肿，化瘀止痛之功效的中药，药品名是“小金丸”，由人工麝香、木鳖子、草乌、枫香脂、乳香、没药、五灵脂、当归、地龙、香墨等10味中药制备而成。该方是中医经典名方，可用于多种疑难杂症如甲状腺肿、良性前列腺增生、带状疱疹后遗神经痛、乳腺囊性增生、慢性盆腔炎包块及结节性筋膜炎等的治疗。目前已有片剂、胶囊剂等多种制剂上市，如CN106265992A公开了小金胶囊及其制备方法，CN102764311A公开了小金分散片及其制备方法。

为了探明中药复方配伍规律，揭示其药效作用机制和治疗疾病的物质基础，申请人在前期研究的基础上对小金制剂进行了大量基础研究，其中包括采用现代提取分离技术对中药的总多糖、总皂苷、总黄酮等部位进行提取分离，结合药效学试验确定有效部位群；同时还开展血清药理学研究，观察了进入体内的有效成分及其代谢产物以及一些经药物作用后机体所产生的内生性产物的药理作用。在研究过程中，首次发现小金制剂经口服后进入血清的一系列可能具有生理活性的化合物，为了更好地监测这些化合物在体内的药代动力学过程，有必要建立一种便捷、准确、灵敏的含量测定方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种同时测定小金制剂体内六种代谢产物含量的方法。

所述小金制剂由以下重量份数的原料制成：人工麝香1-20份、草乌40-60份、乳香20-40份、五灵脂40-60份、地龙40-60份、木鳖子40-60份、枫香脂40-60份、没药20-40份、当归20-40份、香墨1-10份，

所述六种代谢产物为乌头原碱、准噶尔乌头碱、里奥林、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸、蚯御素，它们的化学结构如图1所示。

所述测定方法包括以下步骤：

1)对血浆样品进行前处理，得待测样品溶液；

2)向待测样品溶液中加入正离子内标和负离子内标，进行HPLC-MS/MS检测，其中，所述高效液相的固定相是C18键合硅胶色谱柱，流动相A是0.05-0.5％甲酸水溶液，流动相B是乙腈，采用梯度洗脱，流速为0.1-0.5mL/min，柱温为25-40℃，所述质谱采用正负离子两种模式，电喷雾电离离子源，扫描方式为多反应离子监测模式，正离子模式下，检测乌头原碱、准噶尔乌头碱、里奥林、3-乙酰基-11-酮基-β-乳香酸、11-酮基-β-乳香酸和正离子内标原阿片碱；负离子模式下，检测蚯御素与负离子内标异嗪皮啶。

优选地，所述正离子内标为原阿片碱，所述负离子内标为异嗪皮啶。

优选地，所述流动相A是0.1％甲酸水溶液。

优选地，所述流速为0.3mL/min。

优选地，所述柱温为35℃。