[发明专利]一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法

说明书

本申请涉及蛋白标记技术领域，具体涉及一种基于蛋白巯基耦连的抗体标记方法，所述方法包括如下步骤：(1)，在polymer管中，加入39‑195μl L‑缓冲液，以溶解聚合物polymer；然后加入1‑5μl 100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；(2)，将孵育结束后的溶液转移至3KDa超滤管，离心，去上清，得到中间体试剂；(3)，在抗体对应的超滤管中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合，以进行耦连反应，得到金属标记的抗体；其中，所述L‑缓冲液和所述polymer为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

技术领域

本申请涉及蛋白标记技术领域，具体涉及一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法。

背景技术

在监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象等都需要应用到蛋白质标记技术。高效的蛋白质标记技术能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。

目前有多种蛋白质标记技术，如同位素标记、荧光标记、量子点标记、生物素标记、酶联标记等来帮助我们研究感兴趣的蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能，乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。使用金属对蛋白质进行标记，能够避免样本的自发荧光背景的干扰、无生物危害、极高的灵敏度、高通零等优势，具备极大的应用情景。随着质谱仪及质谱流式细胞技术的发展越来越迅速，发展越来越迅速，国内外对应用于该技术的金属蛋白试剂需求也越来越大，以满足高维度细胞检测的需求。

发明内容

本申请提供一种基于蛋白质巯基耦连金属的抗体标记方法，可以将不同的蛋白质和不同的金属耦连，通过检测金属，可实现多个蛋白的同步检测，方法简便、成本较低、实用性强、效率和可靠性较高。

本申请提供了一种基于蛋白巯基耦连的抗体标记方法，所述方法包括如下步骤：(1)，在polymer管中，加入39-195μl L-缓冲液，以溶解聚合物polymer；然后加入1-5μl100mM金属盐离子溶液，混匀后孵育；(2)，将孵育结束后的溶液转移至3KDa超滤管，离心，去上清，得到中间体试剂；(3)，在抗体对应的超滤管中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合，以进行耦连反应，得到金属标记的抗体；其中，所述L-缓冲液和所述polymer为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

在一些实施例中，所述巯基已被还原的抗体通过以下步骤制备得到：

(a)，在抗体对应的超滤管中，使用R-缓冲液混合抗体；

(b)，在步骤(a)抗体对应的超滤管中加入用R-缓冲液混合后巯基还原剂，以还原抗体的巯基；其中，

所述R-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

在一些实施例中，所述巯基还原剂为TCEP。

在一些实施例中，所述抗体为免疫球蛋白、配体、短肽中的任一种。

在一些实施例中，所述免疫球蛋白为lgG免疫球蛋白。

在一些实施例中，所述金属为以下任一种：

镧La、钇Y、镨Pr、钕Nd、钐Sm、铕Eu、钆Gd、铽Tb、镝Dy、钬Ho、铒Er、铥Tm、镱Yb、镥Lu、铟In、金Au、铂Pt、铋Bi。

在一些实施例中，在步骤(1)之前，所述方法还包括：在室温下，使所述polymer复温15min。

在一些实施例中，在步骤(3)中，所述巯基已被还原的抗体为将100μg抗体的巯基还原后得到。

在一些实施例中，在步骤(3)中，将所述中间体试剂和巯基已被还原的抗体混合后，在37℃孵育1-2小时，以进行耦连反应。