[发明专利]合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母的构建方法及其菌株

权利要求书

1.一种能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，以能合成赤藓糖醇的解脂耶氏酵母菌株为底盘微生物，通过代谢工程或基因工程手段，构建以葡萄糖、果糖、甘油、淀粉中的一种或几种为碳源发酵合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的方法；所述代谢工程或基因工程手段包括在底盘微生物解脂耶氏酵母细胞中表达编码木糖醇脱氢酶的基因和编码5-磷酸木糖醇脱氢酶的基因，以及在底盘微生物解脂耶氏酵母细胞中下调表达其自身的转酮酶基因。

2.如权利要求1所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述底盘微生物为基因组中含有与SEQ ID NO.3序列具有97%及以上同源性的DNA序列的解脂耶氏酵母菌株。

3.如权利要求2所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，所述底盘微生物为能合成赤藓糖醇的解脂耶罗维亚酵母（Yarrowia lipolytica）ery929 CGMCC No. 18478。

4.如权利要求1或3所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括在底盘微生物解脂耶氏酵母细胞中表达以下基因的一种或一种以上：

（1）编码5-磷酸木酮糖磷酸酶的基因；

（2）编码木糖醇转运蛋白的基因；

（3）编码NADP转氢酶的基因。

5.如权利要求4所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括在底盘微生物解脂耶氏酵母细胞中敲除或下调表达其自身的以下基因中的一种或一种以上：

（1）甘露醇脱氢酶基因；

（2）阿拉伯糖醇脱氢酶基因；

（3）木酮糖激酶基因；

（4）5-磷酸核酮糖异构酶基因。

6.一种如权利要求1-5中任一项所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株的构建方法构建得到的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株。

7.如权利要求6所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株，其特征在于，所述菌株为解脂耶罗维亚酵母（Yarrowia lipolytica）ery959ΔTKLΔMDHΔArDHΔRPIΔXKS1 CGMCC No. 18479。

8.一种利用如权利要求6或7所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株发酵合成木糖醇的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

S1、将解脂耶罗维亚酵母（Yarrowia lipolytica）ery959ΔTKLΔMDHΔArDHΔRPIΔXKS1CGMCC No. 18479菌株培养于含碳源、氮源、无机盐以及水的培养基中，在起始pH 值3.0～7.0，温度25～35℃条件下振荡或者搅拌发酵培养，发酵结束后菌液分离得到含木糖醇的发酵液以及酵母细胞；

S2、从所述含木糖醇的发酵液以及酵母细胞中分离纯化得到木糖醇。

9.如权利要求8所述的利用能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株发酵合成木糖醇的方法，其特征在于，步骤S1中，所述培养基中的碳源为葡萄糖、果糖、甘油、淀粉中的一种或几种混合，所述培养基中碳源含量为50～350克/升；所述培养基中的氮源为蛋白胨、酵母粉、酵母浸膏、玉米浆干粉、磷酸氢二铵、柠檬酸铵、氨基酸中的一种或几种的混合；所述培养基中的无机盐为硫酸镁、氯化锰、氯化铜、氯化锌中的一种或一种以上。

10.如权利要求8所述的能合成木糖醇的重组解脂耶氏酵母菌株发酵合成木糖醇的方法，其特征在于，步骤S2中，所述分离纯化包括：菌液分离得到澄清含木糖醇的发酵液、浓缩得到富含木糖醇浓缩液、一次结晶得到木糖醇粗制品、粗制品重溶、离子交换去除离子、脱色、浓缩、二次结晶得到木糖醇精制品、干燥。