[发明专利]一种人的外周血树突状细胞培养的无血清培养基

说明书

本发明提供一种支持人外周血树突状细胞培养的无血清培养基，涉及生物培养领域，包括刀豆蛋白A(Con A)、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)、植物血细胞凝集素(Phytahematoagglutinin，PHA)和IL‑2、基础培养基PMI‑1640以及血清替代物(牛血清白蛋白、重组人胰岛素、柠檬酸铁和氨基酸母液)。本发明无血清人的外周血树突状细胞培养基采用血清替代物替代传统使用的动物或人血清，降低培养基成本、传播疾病的风险；本发明的无血清人的外周血树突状细胞培养基所用组分确定，避免了传统血清成分复杂，不同批次间具有质量差异，而导致培养效果波动的问题；本发明提供的细胞培养基树突状细胞转换率与树突状细胞分裂指数高，试剂成本低、质量稳定，可大批量生产用于实验研究和临床医疗。

技术领域

本发明属于生物培养领域，具体涉及一种支持人的外周血树突状细胞培养的无血清培养基。

背景技术

树突状细胞(dedriticcells，DCs)是人体内重要的抗原提呈细胞，在先天性免疫、适应性免疫和维持自身组织免疫耐受的过程中起着非常关键的作用。近年来的研究表明，DC在体内和体外均能特异性提呈肿瘤抗原，并且能够有效的激活特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocyte，CTL)，从而启动机体的免疫应答。目前，树突状细胞的体外培养技术逐渐完善，应用DC的高效抗原呈递作用衍生而来的过继性免疫疗法逐渐应用到恶性肿瘤、感染性疾病以及各种自身免疫性疾病的治疗行列当中。体外培养DC的质量直接关系到治疗肿瘤的疗效，目前有很多不同的体外培养DC的方法，特别是在树突状细胞的体外分离、培养乃至其成熟的过程中，一些特定的细胞因子起着至关重要的作用。

目前，临床医生与患者越来越关注DC在抗感染免疫过程中的作用。在抗细菌、真菌、病毒等感染的免疫中，DC起到了重要的作用。尤其是在病原体初次进入患者机体内部所诱导的免疫应答中，CD80、CD83、CD86、HLA-DR等DC表面的共刺激分子升高，由此同时DC还会分泌IL-1，IL-12、TNF-α等炎性细胞因子和趋化因子。在摄取、吞噬、加工细菌抗原的同时，DC逐渐活化并成熟，在迁移至次级淋巴器官的工程中，使抗原得到广泛的提呈，从而激活全身的细胞免疫、体液免疫应答对抗感染；在抗病毒免疫过程中，DC同样可以快速、有效提呈病毒抗原，并归巢至胸腺、脾等免疫器官，激活患者机体内CD4+、CD 8+ T细胞，产生抗病毒免疫应答，最终消除病毒。但是，由于DC自身具有独特的生物学特征，因此在HIV与HBV等病毒感染过程中，DC有可能成为病毒复制、感染的有利场所。当DC与T细胞相结合时，被感染的DC将病毒转染至健康的T细胞内，随着T细胞的增殖分化促进了病毒在患者机体内部的扩散速度，加快了患者机体免疫功能的损失，加重了患者的病情。

常规的外周血树突状细胞培养基是在基础培养基(如RPMI-1640)的基础上添加一定量的动物血清(如牛血清)，作为提供细胞生长、增殖所必需的物质。但利用动物血清的缺点也很明显：由于血清成分复杂，不仅有促生长物质，还含有潜在的生长抑制的有害物质；不仅成本较高，而且增加了传播疾病的风险，且不同批次的血清存在的质量波动，造成培养基细胞培养效果的批间差异。

发明内容

本发明提供一种无血清人的外周血树突状细胞培养基，包括刀豆蛋白A(Con A)、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)、植物血细胞凝集素(Phytahematoagglutinin，PHA)和IL-2、基础培养基PMI-1640以及血清替代物(牛血清白蛋白、重组人胰岛素、柠檬酸铁和氨基酸母液)。

优选地，本发明的无血清人的外周血树突状细胞培养基，包括如下组分：RPMI-1640培养基干粉10.4g/L，碳酸氢钠2.0g/L，牛血清白蛋白4.0g/L，刀豆蛋白A 20mg/L，氨基酸母液20ml/L，重组人胰岛素10mg/L，脂多糖10mg/L，柠檬酸铁1mg/L。

优选地，本发明的无血清人的外周血树突状细胞培养基，所述氨基酸母液包括L-谷氨酸、L-甘氨酸和L-天冬氨酸、L-精氨酸。