[发明专利]一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法

说明书

本发明实施例涉及一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法，其包括以下步骤：除去临床标本中的液体部分以获得真菌和/或细菌的浓缩物；在获得的浓缩物中，加入适量的溶菌酶、溶壁酶和玻璃珠，混合，以裂解浓缩物中所含真菌和/或细菌细胞的细胞壁获得细胞液；使细胞液中蛋白组分变性降解以释放基因组DNA获得混合液。该方法既适用于细菌又适用于真菌，所加入的用于裂解真菌细胞壁的溶壁酶不会影响细菌基因组DNA的提取，所加入的用于裂解细菌细胞壁的溶菌酶不会影响真菌基因组DNA的提取。当化验人员需要对临床样本中的菌株进行基因组DNA提取时，无需区分其是细菌还是真菌。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法。

背景技术

细菌以及真菌在环境中普遍存在，在特定的条件下(如意外伤口，手术，使用呼吸机等)其可进入人体的血液循环系统、泌尿系统，下呼吸道，中枢神经系统等，从而产生比较严重感染甚至致死。

由于细菌细胞壁的主要组分是肽聚糖，而真菌细胞壁的主要成分是几丁质，二者的细胞壁破碎方式有所不同。因此在现有技术中是用提取细菌基因组DNA的试剂盒来提取细菌基因组DNA，用提取真菌基因组DNA的试剂盒来提取真菌基因组DNA，二者相互独立提取，现有技术中缺乏能同时适用于细菌和真菌的基因组DNA提取方法。

另外，在临床标本中，细菌及真菌的含量并不固定，而是与疾病的发病状态有关系。不同种类和来源的临床标本如：血液、脑脊液、下呼吸道灌洗液和尿液中，细菌及真菌的含量差异较大(10¹-10⁸CFU/mL)。同时，对于未知标本，由于不知道其中是否含有细菌和/或真菌，也不知道其浓度，因此现有的临床检测技术，所有标本都要先将细菌和/或真菌体外培养至一定浓度后(如：1.5×10⁸CFU/mL)，然后再提取基因组DNA。由于需要体外培养，所需检测时间大大延长；并且，临床标本中的抑制物质(如抗菌药物)干扰常会导致其中细菌的体外培养失败，从而使得检验结果不准确或灵敏度不高，从而使得细菌或真菌的含量无法检测到。

硅胶膜离心柱是指一种离心柱提法经常使用的离心柱，由一个套管及一个吸附柱组成。其中吸附柱底部安装一个圆形的硅胶介质的吸附膜。其中硅胶介质吸附膜表面有硅羟基，可以选择性的吸附DNA，并且具有一定的膜通透性，在离心时可以使液体通过。套管则为吸附柱提供一个离心的支架以及离心时收集废液的作用。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容

发明目的

本发明的目的在于提供一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法，该提取方法结合了酶法、玻璃珠破碎法等相关实用操作技术以释放基因组DNA，并利用硅胶膜离心柱为介质，从不同类型的临床标本中同时提取细菌和/或真菌的基因组DNA。该方法既适用于细菌又适用于真菌，所加入的用于裂解真菌细胞壁的溶壁酶不会影响细菌基因组DNA的提取，所加入的用于裂解细菌细胞壁的溶菌酶不会影响真菌基因组DNA的提取。当化验人员需要对临床样本中的菌株进行基因组DNA提取时，无需区分其是细菌还是真菌，都可以采用本发明基因组DNA提取方法，即该方法既方便了化验人员，也降低了其出错的可能性。

解决方案

为实现本发明目的，本发明实施例提供了一种适用于细菌和/或真菌的基因组DNA提取方法，其包括以下步骤：

除去临床标本中的液体部分以获得真菌和/或细菌的浓缩物；

在获得的浓缩物中，加入适量的溶菌酶、溶壁酶和玻璃珠，混合，以裂解浓缩物中所含真菌和/或细菌细胞的细胞壁获得细胞液；