[发明专利]一种耐高氨氮HN-AD的菌株分离方法

权利要求书

1.一种耐高氨氮HN-AD的菌株分离方法，其特征在于，有以下步骤：

1)取垃圾渗滤液作为菌种，富集，得到富集菌种；

2)菌种驯化

2.1低氨氮浓度驯化

富集菌种接入反应器的模拟废水中，设置初始氨氮浓度为100mg/L开始驯化，待模拟废水中的氨氮低于10mg/L后，更换模拟废水，提高模拟废水氨氮浓度至200mg/L，重复，至菌种氨氮耐受浓度为300mg/L，氨氮去除率≥90％，得到低氨氮浓度驯化的菌液；

2.2中氨氮浓度驯化

取步骤2.1所述的低氨氮浓度驯化的菌液，至新的反应器中，将所述菌液的氨氮浓度从300mg/L逐级提高到700mg/L，氨氮去除率≥80％，得到中氨氮浓度驯化的菌液；

2.3高氨氮浓度驯化

取中氨氮浓度驯化的菌液，至新的反应器中，将所述菌液的氨氮浓度从700mg/L逐级提高到1100mg/L，氨氮去除率≥70％，驯化结束，得到耐高氨氮HN-AD的混合菌液；

3)梯度稀释

取步骤2.3所述的混合菌液按10^-1-10^-7进行梯度稀释，涂布在固体培养基上，于25-35℃培养，待菌落长成后，挑选不同形态的菌落在另一固体培养基上，分区，分别于25-35℃培养，至生成的菌落为不同形态的单一菌落，得到耐高氨氮HN-AD的菌株。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤1)所述垃圾渗滤液的初始氨氮浓度为1800-2000mg/L。

3.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤1)所述富集的方法是，取垃圾渗滤液接种于异养硝化培养基，充分摇匀，30℃、170r/min条件下培养，2d后4℃保存，按接种量为5％，将富集菌液接种于异养硝化培养基上，相同条件富集传代3次。

4.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤2)低氨氮浓度驯化中去除氨氮的时间为2～3天；中氨氮浓度驯化中去除氨氮的时间为4～5天；高氨氮浓度驯化中去除氨氮的时间为6～7天。

5.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤2.1所述模拟废水的碳氮比为10-20：1，pH为7.0-11.0。

6.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：步骤2.1所述反应器由恒温加热搅拌器、容器、气泵组成。

7.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：所述分离培养基由C₆H₅O₇Na₃ 11.47-45.87g/L，(NH₄)₂SO₄ 3.77-7.54g/L，微量元素50ml/L组成；加水混合灭菌溶解制得，碳氮比为10-20:1。

8.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于：所述固体培养基由C₆H₅O₇Na₃ 11.47-45.87g/L，(NH₄)₂SO₄ 3.77-7.54g/L，15-20g/L琼脂粉，微量元素50ml/L组成；加水混合灭菌溶解制得，碳氮比为10-20:1。

9.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于：所述异养硝化培养基由C₆H₅O₇Na₃1.43-31.53g/L，(NH₄)₂SO₄0.47-5.19g/L，微量元素50.0ml/L，加水混合灭菌溶解制得，碳氮比为10-20:1。

10.根据权利要求7-9任一所述的分离方法，其特征在于：所述微量元素组成为：MgSO₄.7H₂O 2g/L，MnSO₄.H₂O 0.1g/L，CaCl₂ 1.5g/L，FeSO₄.7H₂O 0.1g/L，K₂HPO₄ 5.0g/L。