[发明专利]一种复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法

权利要求书

1.一种复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，

步骤1 以热塑性可降解聚合物为打印原料，采用熔融沉积型3D打印机制备带有镂空花纹的矩形长条胚体，

步骤2 分别对矩形长条胚体进行螺旋卷曲后得到内径匹配并可同轴嵌套的成对胚体螺旋管，对胚体螺旋管进行热处理、嵌套后得到由内外层胚体螺旋管组成的双层支架，并用聚乳酸缝合线将双层支架一端缝合，

步骤3 在外层胚体螺旋管内壁上依序内衬培养时转染了血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子的内皮细胞片层、尿路上皮细胞片层以及培养时转染了人血小板生长因子的平滑肌细胞片层，并填充细胞外基质，再缝合双层支架的另一端，经凝血酶固定5～10分钟后即可得尿道组织工程支架；所述细胞外基质包括作为必要成分的纤维蛋白原、胶原蛋白和糖胺聚糖所构成的凝胶，且其体积百分比分别为60-80％的纤维蛋白原、10-20％的胶原蛋白和10-20％的糖胺聚糖，凝血酶固定的细胞外基质中的纤维蛋白原迅速纤维化形成纤维蛋白，并构成连通的空间网络结构。

2.根据权利要求1所述的复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，内外层胚体螺旋管的内径相差2.0-2.4mm，矩形长条胚体的厚度为0.1-0.5mm，缝合线采用线径0.2mm的聚乳酸丝并做进行灭菌处理。

3.根据权利要求1所述的复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，热塑性可降解聚合物为医用级别的聚乳酸、聚己内酯、聚羟基乙酸三种热塑性可降解聚合物的单体聚合物或共聚物及其混合物中的一种或几种。

4.根据权利要求1所述的复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，带有花纹的矩形长条胚体的表面覆盖率为20-40％，所谓表面覆盖率是指有聚合物填充的花纹面积占整个矩形面积的比例。

5.根据权利要求1所述的复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，对胚体螺旋管进行的热处理为退火处理，退火的温度为30-120℃，退火时间为5-20min。

6.根据权利要求1所述的复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，所述细胞外基质水凝胶至少还包括作为非必需成分的层粘连蛋白、纤维黏结蛋白、接触蛋白、抗黏附蛋白、肌腱生长蛋白、骨黏连蛋白、基底膜蛋白和粘多糖中的一种，且必要成分与非必需成分的体积百分比为3～4∶2～1。

7.根据权利要求1所述的复层螺旋尿道组织工程支架的制备方法，其特征在于，所述内皮细胞片层是利用温度敏感性培养皿于37℃下对转染了血管内皮生长因子和成纤维细胞生长因子的内皮细胞进行细胞爬片，并降温至20℃剥离得到的细胞片层；所述尿路上皮细胞片层是利用温度敏感性培养皿于37℃下对尿路上皮细胞进行细胞爬片，并降温至20℃剥离得到的细胞片层；所述平滑肌细胞片层是利用温度敏感性培养皿于37℃下对转染了人血小板生长因子的平滑肌细胞进行细胞爬片，并降温至20℃剥离得到的细胞片层。