[发明专利]检测血液中利培酮和9-羟基利培酮的方法

说明书

本发明提供了检测血液中利培酮及9‑羟基利培酮的方法包括：制备利培酮及9‑羟基利培酮标准储备液、制备利培酮及9‑羟基利培酮标准中间液、制备内标工作液和制备标准溶液，利用液相色谱‑质谱联用仪检测标准溶液，拟合得到利培酮及9‑羟基利培酮对应的标准曲线方程分别为：y₁＝a*x₁+b和y₂＝c*x₂+d；对待测血液进行处理，利用液相色谱‑质谱联用仪检测待测血液，计算出待测血液中的利培酮及9‑羟基利培酮的浓度，在本发明中，分析时间短、干扰小，内标定量适宜特异性强、灵敏度高。

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种检测血液中利培酮和9-羟基利培酮的方法。

背景技术

利培酮为苯并异恶唑衍生物，属第二代抗精神病药，用于治疗急性和慢性精神分裂症。特别是对阳性及阴性症状及其伴发的情感症状(如焦虑、抑郁等)有较好的疗效。也可减轻与精神分裂症有关的情感症状。9-羟基利培酮是利培酮的主要活性代谢产物，与利培酮有相似的药理作用，两者共同构成抗精神病的活性成分，故对利培酮及其活性代谢产物的监测具有重要的临床意义。

目前，检测服用利培酮的患者的血液样本时，通常采用高相液相色谱法进行测试。

但是，通过上述方法检测血液样本中的利培酮和其活性代谢物9-羟基利培酮含量时，需要对血液样本进行前处理，例如，萃取。由于萃取处理的时间通常较长，从而使得检测时间长，导致血液样本的检测效率低。

发明内容

本发明提供了一种检测血液中利培酮和9-羟基利培酮的方法，能够提高血液样本的检测效率。

本发明的检测血液中利培酮和9-羟基利培酮的方法，其中：它包括以下步骤：

(一)标准溶液的标定

(a)制备利培酮和9-羟基利培酮标准储备液

精确称取利培酮标准品2.38mg置于2mL冻存管，用含水量为0％-30％的甲醇溶液进行溶解，并定容于1mL，得到利培酮标准储备液，在-80℃条件下保存；

精确称取9-羟基利培酮标准品1.87mg置于10mL容量瓶，用含水量为30％-80％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10mL，得到9-羟基利培酮标准储备液，在-80℃条件下保存；

(b)制备利培酮和9-羟基利培酮的标准中间液

将上述步骤(a)的利培酮标准储备液和9-羟基利培酮标准储备液分别用含水量为10％～80％甲醇稀释液稀释成10mg/L的标准过渡中间液，再按照1∶1的体积混合，用含水量为10％～80％甲醇稀释液稀释上述利培酮和9-羟基利培酮的标准过渡中间液，制成含有浓度为5ng/mL～1000ng/mL的利培酮和浓度为5ng/mL～1000ng/mL的9-羟基利培酮的至少三种浓度的利培酮和9-羟基利培酮标准中间液，并在-80℃条件下保存；

(c)制备内标工作液

将100mg/L的利培酮-d4储备液和1000mg/L的9-羟基利培酮-d4储备液按照10∶1的体积混合，得到混合液，上述混合液中所含的利培酮-d4储备液和9-羟基利培酮-d4储备液的浓度相同，用含水量为10％～80％甲醇稀释液稀释上述混合液，得到一种含有50～250ng/mL利培酮-d4和含有50～250ng/mL 9-羟基利培酮-d4的内标工作液，并在-80℃条件下保存；

(d)制备标准溶液

分别移取10μL上述至少三种浓度的利培酮和9-羟基利培酮的标准中间液，在上述每一种利培酮和9-羟基利培酮的标准中间液中分别加入10μL的内标工作液和390μL含水量为70％甲醇稀释液，并在转速为1000～2000rpm下涡旋混匀30s～1min，制成至少三种不同浓度的标准溶液，其中，每一种浓度的标准溶液中包含的内标物的浓度相同；