[发明专利]一种降低柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法

说明书

本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法。应用碳量子点纳米颗粒制备碳量子点纳米土霉素，并树干注射于黄龙病罹病柑橘植株。所述碳量子点纳米土霉素的制备在于碳量子点纳米颗粒制备和碳量子点纳米土霉素制备。所述碳量子点纳米土霉素具有尺寸小的优点，小于筛管的孔径，而病原菌寄生于植物的筛管中，因此具有较好的杀菌效果；且相应的溶液性质稳定，均一，符合注射要求。所提供的降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法对于柑橘黄龙病的防治具有重要意义，可在农业中具有大规模应用的潜力。

技术领域

本发明属于植物病害防治技术领域，具体涉及一种降低柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法。

背景技术

柑橘黄龙病(Citrus Huanglongbing,HLB)全球肆虐，对于台风地区或需要保护的柑橘品种，仍缺治疗之法，树体一旦感染，只能砍除。进入21世纪以来，科学家们进行了激素、营养干预、渗透胁迫耐受性的小分子靶标CLas毒力和植物生长调节剂等防治黄龙病的研究，效果依然不够理想。虽然美国迫于压力，放开了土霉素(Oxytetracycline，土霉素)和链霉素在佛州柑橘园的使用，但目前抗生素类新型抗菌药物的研发滞后，亟需寻找新型抗菌药物来解决目前面临的严峻问题。土霉素因不易使病原菌产生抗性而备受关注，目前广泛应用于防治对链霉素产生抗性的苹果和梨火疫病病原菌Erwinia amylovora、桃穿孔病原菌Xanthomonas arboricola和蔬菜上病原菌Pseudomonas spp.、Xanthomonas spp.等病原菌。另外，土霉素也通过注射树干用于防治由植原体引起的棕榈和榆树韧皮部坏死病。并且，土霉素是目前唯一允许使用树干注射方法进行病害防治的抗生素。

荧光碳量子点是一种新型碳纳米材料，尺寸1～10nm，具有荧光优异、毒性低、生物相容性好和制备成本廉价等特点。碳量子点表面有较多的悬空键，显示不饱和性，容易与周围原子结合形成更稳定状态，目前在生物传感成像和显示技术方面皆被广泛应用，其荧光颜色可通过改变激发波长进行简单调整。Hu et al.制备b-PEI包被的碳量子点，可在血浆中均匀分布，表明碳量子点可用于生物体内的标记。碳量子点颗粒用于荧光探针优势明显，水溶性高、毒性小且光稳定性强，其表面覆盖有羧基和羟基等亲水基团，导致水溶性极高，Zhao et al.研究表明碳量子点不破坏人类肾细胞，经聚丙烯酸(PAA)、聚乙二醇(PEG)等功能化的碳量子点细胞毒性也很小，Yang et al.通过PL衰减曲线测定表明碳量子点荧光强度72h内稳定。因此，为提高土霉素在柑橘黄龙病中的应用效果，本发明提出了一种碳量子点纳米土霉素。

发明内容

本发明的目的在于提供一种降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法，黄龙病柑橘品种的病原菌CLas(Candidatus Liberibacter asisticus,CLas)含量，本发明提供的方法使用了所述碳量子点纳米土霉素，对比氧化铁纳米土霉素，其尺寸小，易进入筛管，在植株中的转移速度快并显著降低患柑橘黄龙病柑橘品种的CLas含量，有着较好的抑菌效果。

为实现上述目的，本发明采用以下方案：

所述降低患柑橘黄龙病病原菌CLas含量的方法为在离地10～15cm处钻孔0.6～1.5cm深，应用注射器注入碳量子点纳米土霉素；所述碳量子点纳米土霉素的制备在于以下步骤：

1)碳量子点纳米颗粒制备：采用水热法制备，称取柠檬酸和量取乙二胺溶解于去离子水中，200℃加热过夜，反应后自然冷却至室温，将10％聚丙烯酸加入碳量子点溶液中，在80℃下加热4h，获得碳量子点-聚丙烯酸，经透析，真空干燥得碳量子点纳米颗粒；

2)碳量子点纳米土霉素制备：将已制备的碳量子点纳米颗粒分散于水中，并加入土霉素分散，80℃搅拌1h，之后搅拌至常温，即得到碳量子点纳米土霉素。

进一步，碳量子点纳米颗粒与土霉素吸附连接。

进一步，所述碳量子点纳米土霉素的注射浓度为0.1～0.2g/株。