[发明专利]翘嘴鳜雄性分子标记引物及其应用

权利要求书

1.一种翘嘴鳜雄性分子标记引物，其特征在于，所述引物至少包括引物对1、引物对2中一种，所述引物对1包括Contig-1上游引物和Contig-1下游引物，所述引物对2包括Contig-2上游引物和Contig-2下游引物，其中Contig-1上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，Contig-2上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，Contig-1下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。

2.一种利用权利要求1所述翘嘴鳜雄性分子标记引物进行翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）设计引物对1和引物对2；

（2）翘嘴鳜鱼DNA样品制备；

（3）以步骤（2）中的DNA为模板，采用引物对1或引物对2进行PCR扩增，扩增反应结束后，进行电泳检测，若电泳结果显示具有特异性条带，此时所检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为雄性翘嘴鳜鱼，若电泳结果显示不具有特异性条带，此时所检测的翘嘴鳜鱼DNA样品为雌性翘嘴鳜鱼。

3.根据权利要求2所述翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（2）中DNA样品制备采用柱式离心法提取翘嘴鳜鱼DNA。

4.根据权利要求2所述翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（3）中采用引物对1或引物对2进行PCR扩增时，20μl PCR反应体系中包含DNA50 ng，Contig-1上游引物和Contig-1下游引物各0.8μl或Contig-2上游引物和Contig-2下游引物各0.8μl，2×TaqMasterMix 10μl。

5.根据权利要求4所述翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（3）中采用引物对进行PCR扩增时，PCR反应程序是：首先94℃预变性2min；再94℃变性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，共35个循环；再72℃终延伸5min。

6.根据权利要求4或5所述翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（3）进行电泳检测时，采用质量百分含量为1%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增片段的长度。

7.根据权利要求6所述翘嘴鳜鱼性别鉴定的方法，其特征在于，步骤（3）电泳结果显示的特异性条带，采用引物对1扩增出特异性条带的分子大小是374bp；采用引物对2扩增出特异性条带的分子大小是489bp。

8.一种利用权利要求1所述翘嘴鳜雄性分子标记引物进行翘嘴鳜鱼全雌性育种的应用。