[发明专利]一种临床级干细胞无血清培养基

说明书

本发明公开一种临床级干细胞无血清培养基。本发明的培养基以L‑DMEM、IMDM、DMEM‑F12或α‑MEM、mTeSR^TM1培养基、E8培养基和KSR条件培养基等为基础培养基，去除肌醇、亚油酸等脂类物质和合成脂类物质成分，同时含有以下添加成分：聚乙烯醇、骨形态发生蛋白BMP‑4、维生素C、维甲酸、烟酰胺、阿奇霉素。该培养基成分明确，质量可控，不含动物血清成分，可以培养包括多能干细胞和专能干细胞在内各种干细胞，多次传代后可以维持干细胞的“干性”不产生分化的能力。

技术领域

本发明涉及细胞培养用培养基，具体涉及一种临床级干细胞无血清培养基，属于生物医药领域。

背景技术

目前的基础培养基没法支撑干细胞的长期培养，还有优化的空间。而现在更多的是研究关注补充液对干细胞的影响。在传统的干细胞培养过程中通常需要添加一定量的胎牛血清，但是胎牛血清有几个劣势：成本高、批次变异、可用性有限、血清易受病毒、支原体及其他病原体污染以及引起异种免疫反应的可能性问题，同时血清中含有大量的氨基酸、核苷、蛋白质、激素、脂类等微量成分，这些成分的含量和具体作用仍没有完全确定，血清中含有的脂类物质能够促进细胞分化。为了避免以上胎牛血清使用中的缺陷，现在开发了可替代动物血清的培养基，最常用的是人AB血清、人血小板裂解物和无血清的化学限定培养基，但是各有缺点，AB血清和人血小板裂解物均存在病毒污染的可能性，而且不同批次之间有明显的差异；人血小板裂解物释放的多种生长因子可能有抑制细胞生长的物质，以及改变细胞表面标志物表达和细胞功能等；目前化学限定培养基虽然不含血清，能避免血清制品带来的潜在风险，但是也不完美，其可促进干细胞分化，提高免疫原性，不能很好的维持干细胞的干性。因此成分确定，质量安全可控，能够大规模扩增培养干细胞且始终维持“干性”的临床级培养基是临床应用的必然选择。

发明内容

针对以上缺点改进，本发明的目的是提供一种临床级干细胞无血清培养基，该培养基不含动物和人血清制品成分，同时去除影响细胞分化的脂类物质成分和合成脂类的物质成分，成分明确、质量安全可控，既提高了干细胞的正常生长和快增值能力，同时保证干细胞的纯度和干性，适合临床干细胞的大规模生产和应用。

附图说明

图1是脐带间充质干细胞传代培养中细胞培养首次达到80％融合度时的显微镜观察照片以及 P10 代的显微镜观察照片；

图2是脐带间充质干细胞传代培养中细胞培养首次达到80％融合度时以及 P10代的流式检测结果；

图3是IPS细胞复苏后首次达到80％融合度时的显微镜观察照片；

图4是IPS细胞传代培养中细胞培养至P20代的显微镜观察照片。

具体实施方式

以下实施例是对本发明进一步详细说明，而不是对本发明的限制。

实施例1：

本实施例的一种临床级干细胞无血清培养基，以DMEM-F12培养基为基础培养基，并去除DMEM-F12培养基中影响细胞分化的脂类物质成分和合成脂类的物质成分：包括肌醇、亚油酸，同时含有添加成分，添加成分以及其含量（最终浓度）如下：聚乙烯醇5ng/ml、BMP-4 10ug/ml、维生素C 40ug/ml、维甲酸1uM、烟酰胺5ug/ml、阿奇霉素20ug/ml。

具体配置方法是，在配置DMEM-F12培养基时，不添加肌醇和亚油酸成分，或者DMEM-F12培养基用活性炭脱脂处理。在不含脂类成分和合成脂类的物质成分的DMEM-F12培养基中添加上述成分，使其终浓度为以上浓度，由此得到一种临床级干细胞无血清培养基。

实施例2：