[发明专利]一种转基因玉米DAS-40278-9的RPA引物与探针组合、试剂盒及检测方法在审
| 申请号： | 201911099360.0 | 申请日： | 2019-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN110643734A | 公开（公告）日： | 2020-01-03 |
| 发明（设计）人： | 焦彬彬;何善勇;戴婷婷;徐飞;俞禄珍;李想 | 申请（专利权）人： | 上海海关动植物与食品检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 32274 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) | 代理人： | 邱兴天 |
| 地址： | 200131 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 转基因玉米 探针组合 引物 检测 分子生物学技术 实时荧光检测 待测样品 技术手段 扩增曲线 扩增效果 特异性强 衍生品种 灵敏度 试剂盒 扩增 条带 样本 | ||
1.一种转基因玉米DAS-40278-9的RPA引物与探针组合，其特征在于：其正向引物序列如SEQ ID No.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示。
2.权利要求1所述的引物与探针组合在检测转基因玉米DAS-40278-9或其衍生品种中的应用。
3.权利要求1所述的引物与探针组合在制备转基因玉米DAS-40278-9或其衍生品种的检测试剂或检测试剂盒中的应用。
4.一种转基因玉米DAS-40278-9的检测试剂盒，其特征在于，至少包括1次用量以上的权利要求1所述的RPA引物和探针组合，所述RPA引物和探针组合，其正向引物序列如SEQ IDNo.1所示，反向引物序列如SEQ ID No.2所示，探针序列如SEQ ID No.3所示。
5.权利要求4所述转基因玉米DAS-40278-9的检测试剂盒在检测转基因玉米DAS-40278-9或其衍生品种中的应用。
6.一种检测转基因玉米DAS-40278-9的方法，其特征在于：提取待测样品的DNA作为模板，利用权利要求1所述的引物对及探针组合，或权利要求4所述转基因玉米DAS-40278-9的检测试剂盒进行快速扩增及实时荧光检测，如果得到明显的扩增曲线，则表明所检样品含有转基因玉米DAS-40278-9。
7.根据权利要求6所述检测转基因玉米DAS-40278-9的方法，其特征在于，具体步骤如下：
1)采用CTAB法提取样品DNA；
2)在PCR管配制50μL的反应体系：引物DAS-9-F6 2.1μL、DAS-9-R6 2.1μL、DAS-P2 1μL、2×reaction buffer 23.6μL、dNTP 8.2μL、10×Probe E-mix 5μL、20×Core reactionMix2.5μL、50×Exo 1μL、280mM MgOAc 2.5μL、DNA2 μL；
3)将PCR管置于荧光检测仪中，37～42℃孵育30min，如果得到明显的扩增曲线，则表明所检样品含有转基因玉米DAS-40278-9。
8.根据权利要求7所述检测转基因玉米DAS-40278-9的方法，其特征在于，所述的DAS-9-F6、DAS-9-R6和DAS-P2均为0.21μM。
9.根据权利要求7所述检测转基因玉米DAS-40278-9的方法，其特征在于，所述的DNA浓度不小于0.05％。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海海关动植物与食品检验检疫技术中心，未经上海海关动植物与食品检验检疫技术中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201911099360.0/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
