[发明专利]柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法

说明书

本发明公开了柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，包括以下步骤：S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50%甲醇配制成一定浓度的对照品溶液。本发明通过以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂，采用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm测定柴胡炮制前后氨基酸的含量，本测定方法具有可操作性强、成本低、易推广等优势，可作为柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。

技术领域

本发明涉及鳖血柴胡技术领域，具体来说，涉及柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法。

背景技术

柴胡为伞形科植物柴胡或狭叶柴胡的干燥根，味苦，性微寒，具疏散退热、疏肝解郁、升举阳气之功效；主治感冒发热、寒热往来、胸胁胀痛、月经不调、子宫脱垂、脱肛等。常见柴胡饮片有生柴胡、醋柴胡、鳖血柴胡、酒柴胡、柴胡炭、蜜柴胡等多个品种，而以鳖血柴胡最具特色。鳖血柴胡能填阴滋血，抑制其浮阳之性，增强清肝退热的功效。可用于热入血室、骨蒸劳热，至今仍被临床使用。

目前，由于鳖血制柴胡是一种有地方习惯炮制的中药，且需临方炮制，故临床文献报道较少，更缺乏饮片的质量标准规范。

针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。

发明内容

针对相关技术中的问题，本发明提出柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，以克服现有相关技术所存在的上述技术问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

柴胡及其炮制品中氨基酸的含量测定方法，包括以下步骤：

S1、以异硫氰酸苯酯PITC为柱前衍生试剂；

S2、用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm；

S3、测定柴胡炮制前后氨基酸的含量；

其中，步骤S1用色谱柱流动相梯度洗脱检测波长254nm，包括以下步骤：

S101、对照品溶液的制备及衍生化：分别精密称取各氨基酸对照品适量，用50％甲醇配制成一定浓度的对照品溶液，分别吸取各对照品溶液适量，置于同一量瓶中配成混合对照品溶液。吸取混合对照品溶液2mL，置于10mL离心管内，加入0.1mol·L^－1异硫氰酸苯酯-乙腈溶液(12∶988)1mL和1.0mol·L^－1三乙胺-乙腈溶液(139∶861)1mL，涡旋混合1min，暗处放置1h，加入正己烷4mL，涡旋混合1min，静置10min，下层溶液过0.45μm滤膜，备用；

S102、供试品溶液的制备及衍生化：精密称取柴胡样品适量(生品1g，炮制品5g)，准确加入50％甲醇25mL，称定质量，超声提取30min，放至室温，称定质量，加50％甲醇补足减失的质量，于3500r.min^－1离心15min，取上层液2mL置于10mL离心管内，后续试验按步骤S101方法操作，备用。

S103、空白溶液的制备及衍生化：取50％甲醇溶液2mL，后续试验按步骤S101方法进行衍生化处理，即得。

进一步的，还包括以下步骤：

鳖血柴胡制备：取净柴胡段100g，加入洁净的新鲜鳖血50mL及黄酒5mL拌匀，闷润至鳖血和酒液被吸尽，150℃炒10min，取出晾凉，即得。