[发明专利]一种在反胶束酶体系中合成植物甾醇酯的方法

权利要求书

1.一种在反胶束酶体系中合成植物甾醇酯的方法，其特征是：

（1）将脂肪酶缓冲水溶液和表面活性剂溶液混合，通过聚能超声，构成均一的反胶束酶体系；

（2）往体系中加入反应底物植物甾醇和脂肪酸，辅以发散超声作用，反应得到植物甾醇酯；

（3）利用溶剂结晶法得纯化产物。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述构成反胶束酶体系的表面活性剂溶液由2-乙基己基琥珀酸酯磺酸钠（AOT）和异辛烷组成，脂肪酶为非固定化水溶性脂肪酶，缓冲水溶液为50 mmol/mL磷酸二氢钠-磷酸氢二钠（PBS），植物甾醇为β-谷甾醇、豆甾醇、菜油甾醇和菜籽甾醇，脂肪酸为C12~C18脂肪酸，目标合成产物为植物甾醇脂肪酸酯。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反胶束酶体系构建方法是将AOT异辛烷溶液和非固定化水溶性脂肪酶缓冲水溶液（50 mmol/mL PBS，pH 6.5~8）混合，其中[酶]（mg/mL）:[水]（mmol/mL）:[AOT]（mmol/mL）=3~8:200~600:20~30，再采用聚能超声进行均一化，聚能超声频率为20~30 kHz，功率为200~400 W，超声温度为35~55 °C，超声总时间为35~56s，超声方式为“超声5 s-停2 s”。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述酯化反应步骤为将50~100 mmol/mL 植物甾醇和2~4倍植物甾醇摩尔质量的C12~C18脂肪酸加入反胶束酶体系中，在酶载量为总底物的1.5~3%、反应温度为35~55 °C的条件下反应3~6 h，过程中辅以发散超声作用，超声功率为30~40 kHz，功率为200~400 W，超声方式为“超声10 s-停20 s”，反应结束后经HPLC法测得酯化产物得率为85.79~92.82%。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于溶剂结晶法提纯所用溶剂为乙醇和正己烷，具体步骤为将反应液中的溶剂先于旋转蒸发仪中浓缩，真空度为0.01~0.02 MPa，温度为40~50 °C，再将其与正己烷/乙醇溶液（v/v=1/0.5~2）以料液比1:8~10（料以起始植物甾醇量的20%计算）的比例进行混合，置于40~50 ℃水浴锅中，边搅拌边加入1 mol/L NaHCO₃溶液中和过量脂肪酸，静置分层后取上清液，于旋转蒸发仪中浓缩，真空度为0.01~0.02 MPa，温度为30~40 °C；将上述第一次纯化后的粗产物以料液比1:8~10的比例加入无水乙醇，置于40~50 ℃水浴锅中，搅拌洗涤1 h，抽滤后取沉淀，最后50 °C真空干燥6 h除水，得植物甾醇脂肪酸酯产品，经HPLC法测得纯度为98.56~99.43%。

6.根据权利要求1或2的应用，其特征在于可高效率高产率生产植物甾醇脂肪酸酯。