[发明专利]基于LC-MS同时测定人血浆中8种抗结核药物的方法

说明书

本发明属分析化学技术领域，具体涉及一种采用液相色谱－质谱联用法同时测定血浆中8种抗结核药物:利福布丁、氯苯吩嗪、左氧氟沙星、克拉霉素、硫酰亚胺、对氨基水杨酸、莫西沙星和阿米卡星的浓度的方法。本发明兼顾亲水性与疏水性化合物的特性，利用ACN:MEOH:45％TCA进行蛋白质沉淀，提高了亲水性化合物AMK的提取率，用20％ACN+0.2％FA+1％HFBA作稀释剂，HFBA的加入提高了亲水性物质AMK的保留时间。本方法灵敏度高、特异性强、线性范围宽，可用于结核患者血浆中未知浓度待测物的定性和定量分析，并且操作简单、快速、不需要提取挥干的过程，能满足临床治疗药物监测任务紧迫、对检测时间要求高的特点。本发明的检测体系为结核患者治疗药物监测提供了新的技术平台，易于推广应用。

技术领域

本发明属分析化学领域，涉及测定抗结核药物浓度的方法，具体涉及一种测定血浆中8种抗结核药物：利福布丁、氯苯吩嗪、左氧氟沙星、克拉霉素、硫酰亚胺、对氨基水杨酸、莫西沙星和阿米卡星浓度的方法。本方法简便快速，适用于临床治疗药物监测。

背景技术

据资料记载，结核病仍然是危害人类生命健康的一种主要传染病，耐药结核(DR-TB)特别是耐多药结核(MDR-TB)流行日趋严重。据调查，尽管由一线抗结核药异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺组成的标准治疗方案对结核病治疗有效，但是仍有部分患者疗效欠佳，且出现MDR。

通常认为，标准治疗方案疗效欠佳的原因主要是药物浓度低于有效治疗浓度。目前研究显示：有近50％患者中异烟肼的血药浓度低于正常值，在MDR患者中，有约60％患者的二线药物的血药浓度低于治疗窗；其他的一线药物如异烟肼(19％)、吡嗪酰铵(27％)和乙胺丁醇(16％)也有16％到27％不等的患者血药浓度低于定量下限；研究分析其中可能的原因有体重、性别、药物-药物相互作用和个体代谢差异等；业内认为，研究药物-药物相互作用，个体代谢差异的主要方法是对患者进行治疗药物监测(TDM)，测定患者的血药浓度，分析其与疗效的关系，从而调整个体用药方案。

此外，临床实践显示，抗结核药物如异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、对氨基水杨酸钠和乙(丙)硫异烟胺等容易对肝脏造成损害，尤其是在老年患者中，链霉素、(丁胺)卡那霉素、卷曲霉素对肾脏功能有损害，长时间联合用药更加大了肝、肾毒性；研究显示，少量患者中药物浓度高于正常值，成为导致肝肾毒性的一个主要问题，在一些患者中，异烟肼能剂量依赖地诱导神经毒性，对于该些患者则需要降低用药剂量，TDM为调整临床用药剂量提供了一种快速直接的依据，已经成为结核治疗中的一个新的发展方向，如，有研究TDM指导下的探讨在HIV合并TB感染者中提高利福平的用药剂量。目前临床上常用的结核耐药检测痰培养方法所需时间较长，常造成对疗效的判断相对滞后，而TDM快速、通量大更利于个体化给药在临床上的推广。

现有技术进行TDM检测中，首先必须有血药浓度测定的方法，目前常用的TDM的方法主要有三大类:1.色谱法：包括分光光度法和高效液相色谱法；2.免疫学方法：包括酶免疫法、荧光免疫法、化学发光免疫法和荧光偏振免疫法(FPIA)；3.质谱法：包括液相色谱串联质谱技术和气相色谱串联质谱法；如抗生素--万古霉素采用高效液相色谱法(HPLC法)和荧光偏振免疫法(FPIA)进行检测；抗癫痫药物--苯妥英采用紫外分光光度法、酶联免疫吸附法、毛细管区带电泳法或荧光偏振免疫法；然而由于生物样品(血浆)中成分复杂，生物基质常常会干扰药物的测定；且药物的浓度相对较低，常用的色谱法难以满足低浓度药物的测定。

LC-MS/MS法灵敏度高，选择性强，成为药物定量分析的主流技术，能同时定量多种药物，更适合检测药物浓度比较低的样品，因此，LC-MS/MS技术的准确、灵敏、高通量使之在这一领域的应用日趋广泛并趋于常规化。

对于抗结核药物而言，一般文献关注一线药物如异烟肼、利福平、乙胺丁醇和吡嗪酰胺几个一线药物的高效液相色谱(HPLC)或者液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)的定量方法。二线药物如阿米卡星、左氧氟沙星等的LC-MS/MS测定方法也有文献报道。