[发明专利]一种噬菌体及其应用

说明书

本发明公开了一种噬菌体AhyV‑DH1，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.17581；本发明噬菌体对不同来源嗜水气单胞菌具有裂解作用，将本发明噬菌体AhyV‑DH1用于鱼类感染嗜水气单胞菌的防治，实验结果显示无论是在鱼体水平，还是细胞水平噬菌体AhyV‑DH1均能降低嗜水气单胞菌的菌体数量，并提高鱼类的存活率，本发明能减少鱼类养殖中抗生素抗性细菌出现的几率，有利于养殖环境的保护和可持续利用；为将来开发噬菌体作为新型生物制剂防治细菌感染奠定了基础。

技术领域

本发明涉及一种噬菌体及其在制备预防和/或治疗嗜水气单孢菌导致的疾病药物中的应用。

背景技术

气单胞菌（Aeromonas）是气单胞菌科中的一属，为革兰氏阴性兼性厌氧细菌，广泛分布于自然界，是一种人-畜-鱼共患的条件致病菌。据其生长温度和运动能力，该属细菌可以分为2类：一类是嗜温运动性气单胞菌，包括嗜水气单孢菌(Aeromonas hydrophila)、维氏气单胞菌（Aeromonasveronii）；另一类是嗜冷无运动性气单胞，例如杀鲑气单胞菌（Aeromonassalmonicida）。嗜水气单胞菌广泛分布于自然界各种水体，甚至是自来水中。该菌可导致人类腹泻、食物中毒，外伤感染等，重者可导致败血症和腹膜炎等。国内外已将其列为腹泻病原菌的检测范围。嗜水气单胞菌也能引起猪、鸡、鸭、家兔的腹泻和败血症，死亡率较高。嗜水气单胞菌也是淡水养殖动物爆发性感染的主要病原菌，能感染主要淡水养殖品种，包括鱼类（青，草，鲢，鲤，鳙等）、虾、蟹、鳖、贝类，引起水生动物败血症等。目前对嗜水气单胞菌感染主要采用抗生素治疗。但随着抗生素的大量使用，嗜水气单胞菌也出现了大量耐药菌株，这些耐药菌株的出现严重威胁人类健康和水产养殖业的发展；为开创无抗生素水产养殖新时代，国内对抗生素替代疗法的需求日益高涨。

噬菌体是感染细菌的病毒，专性寄生于细菌，烈性噬菌体在裂解细菌的同时获得自身的增殖，所以噬菌体被认为是细菌的天然克星。随着全球范围内的“超级细菌”的不断爆发，噬菌体的研究和应用迎来了“第三次浪潮”，在全球如火如荼地开展着。

嗜水气单胞菌噬菌体是一类杀灭嗜水气单胞菌的病毒。由于嗜水气单胞菌的广泛存在和耐药菌株的不断出现，使用噬菌体防控嗜水气单胞菌感染成为经济有效的方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种噬菌体AhyV-DH1，该噬菌体是从滇池水体中分离得到的，该噬菌体已于2019年4月24日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.17581。

本发明另一目的是将上述噬菌体应用在制备预防和/或治疗嗜水气单胞菌导致的鱼类疾病药物中。

本发明另一目的是提供一种药物组合物，其包括上述噬菌体AhyV-DH1；所述组合物也可以应用在制备预防和/或治疗嗜水气单胞菌导致的疾病药物中。

本发明所述的应用是将噬菌体作为有效活性成分，或者与其他活性成分复配制备生物杀菌剂；还可以加入一种或多种病害防治制剂可接受的辅料，所述辅料包括药学领域常规的填充剂、稀释剂、粘合剂、赋形剂、吸收促进剂、填充剂、表面活性剂和稳定剂等。

本发明目的通过以下技术方案实现：

（1）申请人于2018年9月5日从云南滇池中采集水样，富集水样中的噬菌体，经分离纯化获得一株感染嗜水气单胞菌的烈性噬菌体AhyV-DH1；该噬菌体对嗜水气单胞菌具有广谱的杀菌效果；

（2）将噬菌体AhyV-DH1加入嗜水气单胞菌悬液中，120rpm，30℃培养24h，10000rpm，4℃下离心30min，取上清液经0.22μm滤膜过滤除菌，再经30kDa超滤管浓缩得到噬菌体高纯悬液；