[发明专利]雷公藤细胞色素p450氧化酶在制备松香烷型二萜化合物中的应用

权利要求书

1.分离的酶，所述酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。

2.编码权利要求1所述酶的多核苷酸。

3.根据权利要求2所述的多核苷酸，所述多核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.包含权利要求2所述多核苷酸的表达载体。

5.包含权利要求2所述多核苷酸、或权利要求4所述表达载体的重组宿主菌，所述宿主菌为酵母菌。

6.根据权利要求5所述的重组宿主菌，其中所述酵母菌为BY系酵母菌或WAT系酵母菌。

7.权利要求1所述酶、或权利要求2所述多核苷酸、或权利要求4所述表达载体、或权利要求5所述重组宿主菌在调节和/或合成二萜类化合物中的应用。

8.权利要求7所述的应用，其中所述二萜类化合物为松香烷型二萜类化合物。

9.根据权利要求8所述的应用，其中所述松香烷型二萜类化合物为次丹参酮二烯醇、次丹参酮二烯酸、脱氢枞醇、脱氢枞酸或雷公藤甲素。

10.包含权利要求1所述酶的组合物，所述组合物中至少选自次丹参酮二烯合酶或雷公藤二萜合酶中的一种。

11.一种制备松香烷型二萜类化合物的方法，其包括：

(1)将权利要求1所述酶的基因表达盒插入真核表达载体中，制备表达所述酶的重组酵母菌；

(2)以次丹参酮二烯为底物，饲喂步骤(1)中获得的表达所述酶的重组酵母菌，制备松香烷型二萜类化合物；

(3)以阿松香三烯为底物，饲喂步骤(1)中获得的表达所述酶的重组酵母菌，制备松香烷型二萜类化合物。

12.如权利要求11所述制备松香烷型二萜类化合物的方法，步骤(1)所述的真核表达载体为pESC-Leu，权利要求1所述酶的编码基因插在NotI位点。

13.一种松香烷型二萜类化合物的生物合成方法，其特征在于，所述方法包括：将权利要求1所述酶的编码基因导入酿酒酵母得到重组酿酒酵母，发酵重组酿酒酵母，得到松香烷型二萜类化合物。

14.根据权利要求13所述的生物合成方法，其中所述酿酒酵母为高产次丹参酮二烯酿酒酵母。