[发明专利]一种鉴别滑液囊支原体野毒株与疫苗株MS-H的实时荧光定量PCR试剂盒

说明书

本发明涉及一种区分滑液囊支原体野毒株和疫苗株MS‑H的实时荧光定量PCR试剂盒，试剂盒含有：序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示的PCR引物，序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示的探针，所述探针的5’端分别标记有FAM和VIC报告基团，3’端均标记有MGB荧光淬灭基团。经过体外实验证明本发明的试剂盒敏感性高、特异型强、重复性好，能准确区分MS温度敏感型疫苗株(MS‑H株)和MS野毒株，既可用于对已经经过分离培养并纯化的MS分离株进行鉴别，也可用于免疫鸡群MS‑H疫苗株在鸡体内的复制效率评估与野毒感染的监测。

技术领域

本发明涉及一种荧光定量PCR试剂盒及其应用，特别涉及一种区分滑液囊支原体野毒株和疫苗株(MS-H株)的实时荧光定量PCR试剂盒及其应用。本发明属于生物医药技术领域。

背景技术

滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)感染主要发生于鸡和火鸡，但鸭、鹅、珍珠鸡、鹦鹉、雉鸡和鹌鹑也易感。本病发展缓慢，病程长，可经种蛋发生垂直传播，也能经呼吸道途径进行水平传播，一旦在鸡群中感染，根除很困难，因此在鸡群中长期蔓延，导致饲料利用率低、生长发育迟缓、淘汰率增高、产蛋量下降等。鸡群如存在该病原时，易与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒等其他病原发生混合感染，导致病情加剧，死亡率增高，造成严重的经济损失。

近年来，MS感染对我国家禽养殖业的危害日趋严重，从零星发病到现在发病率居高不下，黄羽肉鸡、白羽肉鸡、肉杂鸡和蛋鸡均有发病。临床症状主要表现为上呼吸道的亚临床感，严重病例也可引起系统性感染并导致传染性滑膜炎，病变部位主要涉及关节的滑液囊膜及腱鞘，引起渗出性滑膜炎、腱鞘滑膜炎或黏液囊炎等。

目前控制MS感染的措施主要包括三种方式：(1)种鸡群的净化。如美国国家家禽改良计划于1974年即将MS列入必须净化的疾病之一，通过釆取严格的生物安全控制和定期的血清学、病原学监测程序相结合的措施，最终实现在种鸡群MS感染完全阴性的状态。但由于MS的水平传播速度很快，因此该方法的实施难度较大，且成本高、周期长，目前世界绝大多数养鸡国家和地区均未能完全实现MS的净化。(2)在饲料中添加抗生素。某些抗生素对预防MS感染有一定作用，但对治疗确诊病例并不是十分有效，且在养殖业推行“抗生素减量化行动”和“无抗养殖”的大趋势下，抗生素的使用受到了严格的限制。另外大剂量长期使用抗生素也存在诱导产生细菌耐药性的潜在风险，因此并不是一种长期可持续的控制措施。(3)使用疫苗免疫进行预防。目前生产中使用的主要是活疫苗，活疫苗的应用一方面可通过在上呼吸道的定植对野毒株感染产生竞争排斥作用，另一方面也能产生有效的粘膜免疫应答，被认为是一种比较有应用前景的防控途径。目前在世界范围内已经通过注册并进入临床应用的主要是澳大利亚生物资源公司的温度敏感型活疫苗MS(MS-H株)和MSD公司的减毒活疫苗MS Live(MS1株)，其中在中国已允许商品化应用的是温度敏感型活疫苗(MS-H株)[(2017)外兽药证字33号]。