[发明专利]一种复合纳米给药系统及其在妇科肿瘤治疗中的应用

权利要求书

1.一种复合纳米给药系统，其特征在于，包括：(a)作为活性成分的紫杉醇与姜黄素组合物；(b)作为靶向材料的miRNA-HA；(c)作为载体的羧基化的磁性介孔二氧化硅；

所述羧基化的磁性介孔二氧化硅纳米给药系统对肿瘤细胞具有主动靶向结合与靶向抑制能力，以抑制肿瘤细胞的迁移与侵袭；靶向材料中的miRNA作为发生靶向抑制剂；靶向材料中的透明质酸(HA)作为主动靶向递送的靶头分子，利用其与肿瘤细胞表面CD44受体的特异性结合，实现对肿瘤细胞的靶向识别，同时HA还作为miRNA与所述羧基化的磁性介孔二氧化硅之间的偶联分子

所述的一种复合纳米给药系统的制备方法，包括如下步骤：

S1、合成靶向材料miRNA-HA

S11)将透明质酸钠溶于去离子水中，室温下溶胀12～24h，得到透明质酸钠水溶液；所述的透明质酸钠水溶液的浓度为10～30mg/mL；

S12)将1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)依次滴加到透明质酸钠水溶液中，活化透明质酸钠中的羧基1～2h，得到混合溶液；所述的EDC与NHS的摩尔比为1：1～0.5，透明质酸钠中的羧基与EDC的摩尔比为1：0.5～2；

S13)将miRNA加到上述混合溶液中，室温、搅拌条件下反应24～48h；反应结束后将反应液转移至透析袋中，两端夹紧，去离子水进行透析纯化后，将透析袋中的溶液冷冻干燥，得到产物miRNA-HA；所述的透明质酸钠中的羧基与miRNA的摩尔比为10～5：1；所述透析袋的截留分子量为3500～375000，透析纯化时间为24～48h；

S2、合成复合纳米给药系统

S21)将靶向材料miRNA-HA溶于去离子水中，室温下溶胀12～24h；

S22)将EDC与NHS依次滴加到步骤S21)得到的溶液中，活化1～2h后，将羧基化的磁性介孔二氧化硅滴加到上述溶液中，室温条件下搅拌2～4h 得到反应液；所述的EDC/NHS的摩尔比为1：1～0.5，靶向材料miRNA-HA上的羧基与EDC的摩尔比为1：1～2；

S23)反应液离心并用去离子水洗涤后进行纯化，冷冻干燥即得复合纳米给药系统；

所述羧基化的磁性介孔二氧化硅的制备方法，包括如下步骤：

a)磁核(Fe₃O₄)的制备：

使用250mL的三口烧瓶，加入蒸馏水120mL，通氮气，再向烧瓶中加入4.81g FeCl₃.6H₂O和2.12g FeC1₂.4H₂O，机械搅拌，加热到65℃，加入10mL28％氨水溶液，向其中加入0.85mL油酸，反应3h，水洗至中性，再用无水乙醇洗两到三次，得到Fe₃O₄纳米粒子，把所得到的Fe₃O₄纳米粒子分散在氯仿中，约超声30min至溶解，得到Fe₃O₄的含量为0.1g/mL；

b)磁性介孔二氧化硅的制备:

取1.0g CTAB分散在50mL的水溶液中，完全溶解之后，加入2mL四氧化三铁的氯仿分散液，超声分散均匀，然后升温至60～70℃，使氯仿蒸发完全，得到Fe₃O₄的水分散液，再加入350mL水和2.8mLNaOH(2M)，搅拌使之混合均匀后，升温至35～40℃，再加入5mL TEOS和20mL乙酸乙酯，反应6～10h，分别水洗三次，无水乙醇洗三次，得到Fe₃O₄/mSiO₂纳米粒子；再将得到的Fe₃O₄/mSiO₂纳米粒子分散到400mL含有4.0g的NH₃NO₃的95％乙醇溶液中，在70～90℃条件下回流6～10h，得到的产物先用乙醇洗涤然后再用水洗涤，真空条件下40℃烘干得到磁性介孔二氧化硅备用；

c)氨基化的磁性介孔二氧化硅的制备：

取1g磁性介孔二氧化硅和250mL无水甲苯混合，超声分散均匀，加入20mLAPTES，并于80℃下搅拌反应12h，用甲苯洗两次，用无水甲醇洗两次，最后于8000rpm离心10min，真空干燥后得到氨基化的磁性介孔二氧化硅；

d)羧基化的磁性介孔二氧化硅的制备：

取10mg氨基化的磁性介孔二氧化硅分散在20mL的DMSO溶液中，加入15mg丁二酸酐和10mg三乙胺，并于60℃下搅拌反应24h，所得到的产物先用乙醇洗再用水洗，真空干燥后即得到羧基化的磁性介孔二氧化硅。